磷酸二酯酶抑制剂对IL-1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其

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磷酸二酯酶抑制剂对IL-1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其

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毕业论文范文题目：磷酸二酯酶抑制剂对IL-1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其，论文范文关键词：磷酸二酯酶抑制剂对IL-1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其
磷酸二酯酶抑制剂对IL-1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：前言1型糖尿病(diabetesmellitus，DM)是胰岛细胞自身免疫破坏的结果，近年来的实验研究表明：细胞因子(cytokines，CK)引起的胰岛细胞损伤在1型DM的发病中起重要作用，但对其机制尚不明确，大量证据表明细胞程序性死亡(凋亡)是1型DM胰岛细胞死亡的主要形式。Zumsteg等实验证实，一氧化氮(NO)合成和FAS／FAS特异性配体(FASL)的相互作用是CK致鼠胰岛细胞损伤的两个独立途径，且高浓度NO是CK致胰岛细胞损伤的终末效应因子。白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)单独或联用肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)可诱导鼠或人胰岛细胞诱生型NO合成酶(iNOS)基因转录，催化NO合成，最终导致胰岛细胞损伤。环磷酸腺苷(cAMP)被普遍认为是胰岛素(insulin，Ins)分泌的一个重要放大器，那些通过刺激腺苷酸环化酶或抑制cAMP磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDE)的药物可极大的增加葡萄糖诱导的Ins分泌。目前将cAMPPD（此处忽略..）Es分为PDE_1～PDE_(11)共11类，国外实验已证实胰岛细胞同时表达PDE_3和PDE_4，但此两型抑制剂对抑制胰岛细胞NO的合成，升高cAMP水平还没有深入的研究。本实验将采用离体培养的雄性Wistar大鼠胰岛细胞，进一步研究IL-1β对胰岛细胞的损伤作用及特异性Ⅲ型PDE抑制剂(西洛酰胺，Cilostamide，CIL)、特异性Ⅳ型PDE抑制剂(咯利普兰，Rolipram，ROL)对胰岛细胞的防护作用及其机制。实验材料一、药品与试剂(1)IL-1β、CIL、ROL购自上海康成生物工程有限公司；(2)Ⅴ型胶原酶、NO试剂盒、胰岛素放免分析药盒购自北京邦定泰克生物技术有限公司；(3)’251一cAMP放免试剂盒购自上海中医药大学同位素室;(4)RPMI一1640培养液购自郑州华美生物制品有限公司;(5)胎牛血清白蛋白、四哇盐(M竹)、二甲基亚矾(DMSO)为sigrna公司产品(细胞生物教研室惠赠)。二、实验动物Wistar雄性大鼠购自中国医科大学动物实验中心。三、实验仪器相差显微镜、超净台、二氧化碳培养箱、滤器、细胞计数板、分光光度仪(日本岛津UV160)等。实验方法1.胰岛细胞的分离及培养:雄性Wist（此处忽略..）ar大鼠，体重100一1509，于无菌条件下取出胰腺，洗净剪碎用Hanks液充分漂洗后，置于含有1.0群LV型胶原酶的Hanks液中，38℃水浴静止消化23而n左右。小心弃去上层胶原酶溶液，迅速加人等量含1.鲍几胎牛血清白蛋白的4℃RpMI一1640培养液清洗两次，离心去上清后加人Hanks液用吸管吹打成细砂样，80目不锈钢筛网过滤。收集胰岛细胞团滤液，100xg离心10分钟后收集胰岛细胞团，加人含10%胎牛血清、2岁L葡萄糖、looIU/而青霉素、100m扩耐链霉素的RPMI一1640培养液后移入100而玻璃培养瓶中，置37℃、5%CO:的二氧化碳培养箱中，隔天换液，培养96小时后胰岛细胞团基本分离成良好的单个胰岛细胞。100xg离心10分钟收集胰岛细胞，制成细胞浓度为6.5x105/耐的胰岛细胞悬液后移人24孔培养板中，每孔胰岛细胞数为6.5x105。2.细胞分组及测定方法:将上述胰岛细胞分为以下九组(每组n二5):(l)正常组(2)30U/rnllL一lp组(3)30U/InllL一lp、200nunoULCIL组(4)30U/InllL一lp、400mmol/LCIL组(5)30U/成L一lp、600mmol/比IL组(6)30U/InllL一lp、sonunoFLROL组(7)3OU/rnllL一lp、100nunoFLRO（略..）L组(8)3OU/tnllL一lp、200nunol/LROL组(9)30U/恤L一lp、200nunoFLCIL、50Inlnol/LROL组上述各组胰岛细胞培养24小时后，分别取上清液lood进行以下实验NO测定:通过分光光度法测定上清液NO代谢产物亚硝酸盐累积量来反映一定时间内NO的合成量。cAMP水平测定:采用‘气一CAMP放免试剂盒测定上清液中CAMP含量。Ins测定:采用放免法测定Ins含量。细胞增殖活性测定:采用M，IT比色法。3.统计学处理:采用SPSS11.0统计软件包，单因素方差分析及线性回归，t检验分析。实验结果1.IL一lp(30U/耐)能显著增加离体培养的雄性Wistar大鼠胰岛细胞的NO合成(P0.01)，同时对cAMP水平，Ins分泌及MTr值具有显著抑制作用(P值均0.01)，如表l所示。2.不同浓度CIL均能显著抑制IL一lp诱导的离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞的NO合成的增加及cAMP水平的下降，如表1所示，较高浓度CIL(600mm亦L)能显著增加hs分泌并升高M，I’r值(P值均0.01)，且随CIL浓度升高，对胰岛细胞NO合成的抑制作用逐渐增强，应用线性回归，t检验分析提示（略..）CIL抑制NO合成具有显著剂量依赖性(R，二0.44，p0.01)，如图l所示。3.ROL随浓度升高，对IL一lp诱导的离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞NO合成的抑制作用逐渐增强，如表1所示，但ROL仅于较高浓度(200mm0FL)时对抑制ILlp诱导的离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞的NO合成的增加及cAMP水平的下降、Ins分泌的减少及M竹值的降低具有显著差异性(P0.01)，且亦呈现出显著剂量依赖性(r二0.56，p0.01)，如图2

以上为本篇毕业论文范文磷酸二酯酶抑制剂对IL-1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其的介绍部分。

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