HDAC抑制剂丙戊酸对小鼠淋巴细胞的药理效应及其作用机制研究

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HDAC抑制剂丙戊酸对小鼠淋巴细胞的药理效应及其作用机制研究

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毕业论文范文题目：HDAC抑制剂丙戊酸对小鼠淋巴细胞的药理效应及其作用机制研究，论文范文关键词：HDAC抑制剂丙戊酸对小鼠淋巴细胞的药理效应及其作用机制研究
HDAC抑制剂丙戊酸对小鼠淋巴细胞的药理效应及其作用机制研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：通过分析组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸(Valproicacid,VPA)对小鼠淋巴细胞增殖、活化、凋亡和细胞因子表达的影响,以及其对凋亡相关分子、MAPKs信号通路、STAT3信号分子和染色质相关蛋白的药理效应,从细胞和分子水平探讨VPA免疫调控作用的机制。方法：分离小鼠淋巴结淋巴细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以CFSE染色结合流式细胞术分析VPA对淋巴细胞增殖率的影响；以CD69荧光抗体染色分析VPA对小鼠T细胞CD69表达的影响；碘化丙锭(PI)染色法检测VPA对小鼠T细胞细胞周期的影响；用Hoechst33342染色结合激光共聚焦显微镜观察细胞核形态；以细胞内细胞因子染色结合流式细胞术分（文章此处忽略..）析VPA对佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)诱导的T细胞表达细胞因子的影响。通过Westernblot检测VPA处理不同时间后对ConA诱导的T淋巴细胞凋亡相关分子Bax和Bcl-2的表达影响,同时检测不同浓度VPA对MAPKs信号通路分子p38、JNK、ERK1/2等磷酸化水平的影响,以及H2A.X、STAT3磷酸化水平和组蛋白H3乙酰化水平的影响。结果：VPA能够剂量依赖性抑制ConA诱导的淋巴细胞增殖；低浓度的VPA(≤1.1mmol/L)促进CD69的表达,然而高浓度的VPA(≥3.3mmol/L)显著抑制CD69的表达。细胞凋亡实验显示,低浓度的VPA对由ConA刺激的淋巴细胞活化诱导的凋亡具有抑制作用,而高浓度的VPA显著促进活化（此处忽略..）淋巴细胞的凋亡；Hoechst33342染色结果可见低浓度VPA处理后细胞核呈弥散均匀的蓝色荧光,呈圆形,染色质较均匀分布,高浓度VPA作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征；光学显微镜下观察,VPA对于ConA诱导的淋巴细胞集落形成具有剂量依赖性抑制。胞内因子染色实验显示,PDB和Ion刺激的小鼠淋巴细胞经不同浓度VPA处理后,CD3+T细胞IL-6+、IFN-γ+和IL-6+IFN-γ+的表达均受剂量依赖性抑制(P0.01)。同样,VPA能够剂量依赖性地降低小鼠CD4+和CD8+T细胞亚群内表达IL-2+、IFN-γ+的细胞比例(P0.01),对于IL-2+IFN-γ+阳性细胞的比例也具有明显抑制作用(P0.01)：此外,VPA（略..）对CD8+T细胞表达IFN-γ的抑制程度高于CD4+T细胞。WesternbIot检测结果显示,低浓度VPA对Bax/Bcl-2表达比率和H2A.X的磷酸化水平均具有抑制作用,而高浓度的VPA则起促进作用；同时低浓度VPA也提高STAT3的磷酸化水平,但高浓度的VPA抑制STAT3的磷酸化水平；对于MAPKs信号通路分子,仅5mmol/L(高浓度)VPA提高p38磷酸化水平,而对于JNK和ERK1/2作用不明显。此外,VPA能够剂量依赖性的提高组蛋白H3的乙酰化水平。结论：VPA能够剂量依赖性抑制ConA或PDB+Ion诱导的淋巴细胞增殖或细胞因子的表达。VPA对ConA诱导的T细胞早期活化标志CD69表达以及淋巴细胞的凋亡具有双（文章此处忽略..）向调节效应：高浓度VPA抑制CD69表达同时促进淋巴细胞发生凋亡,而低浓度的VPA促进CD69的表达同时抑制淋巴细胞发生凋亡。VPA对于活化的淋巴细胞凋亡具有双向效应,在VPA处理早期,可能主要通过调节Bax/Bcl-2比率平衡来调节细胞凋亡,而在VPA处理晚期主要是通过调节信号分子STAT3和p38的活化进而调节细胞凋亡。同时VPA对H2A.X磷酸化也具有双向效应,这与VPA对活化的淋巴细胞凋亡的双向调节作用有一定相关性。

以上为本篇毕业论文范文HDAC抑制剂丙戊酸对小鼠淋巴细胞的药理效应及其作用机制研究的介绍部分。

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