肌肉生长抑素原核表达条件优化与表达产物鉴定

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肌肉生长抑素原核表达条件优化与表达产物鉴定

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毕业论文范文题目：肌肉生长抑素原核表达条件优化与表达产物鉴定，论文范文关键词：肌肉生长抑素原核表达条件优化与表达产物鉴定
肌肉生长抑素原核表达条件优化与表达产物鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：肌肉生长抑素(Myostatin,MSTN)又称生长分化因子-8(GDF-8,growthdiferentiationfactor-8),是TGF-β超家族的一员,对骨骼肌生长、发育、分化具有负调控作用,能够抑制细胞的增殖和分化、调控肌肉重量、抑制肌间脂肪沉积。MSTN活性丧失,会导致动物肌肉组织过度肥大、肌纤维数量增多、直径变大及皮下脂肪减少。大量研究证明,MSTN突变动物骨骼肌肌群分布广泛,肉质提高；通过筛选MSTN基因突变的个体,可以培育出高产肉率的优良畜禽品种。通过抑制体内MSTN基因可以改善萎缩肌肉的功能,为治疗肌营养障碍或因其他疾病引起的肌消瘦提供新的手段。因此,应用基（文章此处忽略..）因工程手段生产MSTN制剂,对于深入研究MSTN的生物学作用和作用机制,开发促进骨骼肌生长的疫苗具有重要意义。本研究在以前构建的MSTN成熟区蛋白原核表达载体基础上,通过优化表达条件,成功获得MSTN纯品,并用于细胞培养和免疫。此外,应用生物信息学方法对表达产物结构进行了鉴定。其具体内容如下：1.留种菌株鉴定：应用PCR、双酶切、测序等方法对保种菌株进行基因的鉴定,应用SDS-PAGE、Western-blot等方法通过测定表达产物含量,筛选获得能够稳定表达的菌株。2.菌株表达条件优化：应用效应面设计的方法进行试验设计,获得最佳的试验条件。然后比较各个条件下的表达量,以表（本文此处忽略..）达量为响应值建立两因素间的响应面,计算得到蛋白表达的最佳条件：培养温度34℃,细胞浓度OD值0.6,IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)浓度0.5×μg/mL,诱导时间6h。在最佳表达条件下,每升菌液可表达目的蛋白87mg。3.MSTN融合蛋白对Hela细胞的作用：分别将0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL浓度的表达产物添加进DMEM培养液中,通过MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)法、流式细胞分类等方法检测表达产物对Hela细胞增殖和细胞周期的影响。结果显示表达产物能够抑制Hela细胞的增殖,并使Hela细胞周期终止于G2期。且随着MSTN融（略..）合蛋白浓度的增加,Hela细胞凋亡的数量升高。4.MSTN融合蛋白免疫对小鼠骨骼肌发育的作用：试验小鼠分别免疫浓度为0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL的MSTN包涵体蛋白或可溶性蛋白,4周后检测血清中抗体水平和骨骼肌横切面面积。结果显示,小鼠免疫MSTN包涵体蛋白或可溶性蛋白后,4周后血清中抗MSTN滴度(320±109.54,400±244.95,320±109.54,240±89.44,200±122.47,300±115.47)高于对照组,免疫可溶性蛋白的小鼠抗体滴度(320±109.54,400±244.95,320±109.54)高于免疫包涵体蛋白的小鼠(240±89.44,200±122.47,300±115.47),但是包涵体蛋白免疫与可溶性蛋白免疫之间的差异不显著(P0.05)；MSTN融合蛋白在1mg/mL浓度组对小鼠骨骼肌横截面积的增大具有促进作用,但是在高浓（文章此处忽略..）度组MSTN融合蛋白抑制骨骼肌发育。5.MSTN蛋白的氨基酸序列分析：应用生物信息学原理,分析MSTN融合蛋白特性,证明MSTN融合蛋白为疏水性蛋白,没有信号肽,也不具有跨膜结构,但是其序列包含有一个TGF-β家族的标签,对细胞的增殖和分化具有一定的调控作用。

以上为本篇毕业论文范文肌肉生长抑素原核表达条件优化与表达产物鉴定的介绍部分。

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