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以颗粒酶B为靶向的磁共振对比剂的制备

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毕业论文范文题目：以颗粒酶B为靶向的磁共振对比剂的制备，论文范文关键词：以颗粒酶B为靶向的磁共振对比剂的制备
以颗粒酶B为靶向的磁共振对比剂的制备毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：背景靶向磁共振成像技术是近年来产生的新型磁共振成像技术,它利用磁共振对比剂二乙三胺五乙酸钆(gadoliniumdiethylenetriaminepentaaceticacid,Gd-DTPA)与特异性载体分子如单克隆抗体结合形成靶向对比剂。在特异性载体分子的引导下,靶向对比剂可以在该载体分子靶向的器官,机体某部位或疾病组织特异性浓聚,改变组织中周围水分子的T1弛豫时间,从而形成特异性磁共振图像。同时,结合了载体分子的对比剂也可以增加对比剂在组织中的保留时间,延长增强效果。与传统磁共振成像比较,靶向磁共振成像技术具备了较高的敏感性,同时新合成的靶向对比剂也能够克服非特异性对比剂的应用局限,对于疾病的早期特异性诊断有一定的价值。目前靶向磁共振技术的研究在肿瘤学领域比较活跃,但在其他方面的应用还有待深入。众所周知,移植排斥反应具有明显的免疫反应激活与炎症细胞浸润过程,其（略..）中也涉及了许多免疫相关分子的特异性表达。颗粒酶B(GranzymeB,GB)是细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)的主要效应分子,在急性排斥(acuterejection,AR)反应中,活化后的T淋巴细胞释放颗粒酶B进入靶细胞,激活核酸内切酶系统,使靶细胞DNA断裂,引起靶细胞凋亡,目前许多研究都提示颗粒酶B对于移植肾排斥的早期诊断有一定的临床价值。本研究利用抗颗粒酶B单抗与Gd-DTPA偶联,探讨其合成的最佳条件,有效性及安全性,以期合成一种新的磁共振对比剂,为移植肾急性排斥反应建立更具特异性的早期无创诊断方法。材料和方法1.MRI对比剂Gd-DTPA-GBmAb制备:将DTPABA溶于二甲基酰胺,配成DTPABA溶液,将颗粒酶B抗体与DTPABA混匀,室温孵育。PD-10柱子纯化,测定抗体浓度。GdCl_3加入NaAc,取该液加入洗脱液中,室（略..）温震荡。PD-10柱子纯化,收集洗脱液,分装,4℃存放。2.鉴定Gd-DTPA-GBmAb对比剂及连接效率:基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrixassistedlaserdesorptionionization/timeofflightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)(Voyager-DESTR4349)光谱测定是否连接并计算每分子抗体连接的Gd~(3+)数量。3.细胞毒性检测:收集对数生长期人类肾小管上皮细胞,接种于96孔板。37℃孵育,至细胞单层铺满孔底,分别加入一定浓度梯度的Gd,Gd-DTPA,GdCl_3和Gd-DTPA-GBmAb,孵育12小时,MTT法测定细胞毒性。4.Gd-DTPA-GBmAb的免疫活性检验:取正常雄性成年SD大鼠甲状腺组织,常规石蜡包埋切片,采用ABC法(Avidin-biotin-peroxidaseComplexmethod,卵白素-生（略..）物素-过氧化物酶连结法),分为实验组(Gd-DTPA-GBmAb),阳性对照组(GBmAb)及阴性对照组(PBS),通过免疫组化法比较三组之间的阳性结果表达量,从而判定Gd-DTPA-GBmAb的免疫活性。5.统计学方法:细胞毒及免疫组化的实验数据采用均数±标准差,组间比较采用t检验,SPSS13.0统计软件进行分析,统计学检验水准为α=0.05,P＜0.05时差异具有显著性。结果1.MALDI-TOF-MS鉴定结果显示颗粒酶B单抗的质荷比高峰主要出现在133986.41处,而连接了Gd-DTPA后,高峰主要在139736.06的位置出现;根据质谱结果计算得每分子抗体可以连接20个左右的Gd~(3+);2.MTT法结果显示Gd,DTPA,Gd-DTPA以及Gd-DTPA-GBmAb组在浓度逐渐递增的情况下对于细胞活性没有明显影响,且四组之间差异无统计学意义(P＞0.05);3.免疫组化结果显示靶向对比剂Gd-DTPA-GBmAb组阳性细胞数为13.4±3.12,阳（文章此处忽略..）性对照组阳性细胞数为14.53±0.81,阴性对照组阳性细胞数为0.00±0.00。组间比较采用t检验,其中阳性对照组,实验组分别与阴性对照组比较均具有显著性差异(P＜0.0001),且阳性对照组和实验组比较没有统计学差异(P=0.516)。结论1.Gd-DTPA能够通过简单的螯合反应和颗粒酶B单抗以相对较高的浓度结合,为靶向对比剂的合成提供借鉴。2.MALDI-TOF-MS鉴定了我们所设定的条件能够合成磁共振靶向对比剂Gd-DTPA-GBmAb。3.细胞毒实验及免疫学实验证实靶向对比剂Gd-DTPA-GBmAb具有良好的免疫活性,无明显细胞毒性,为之后的动物实验提供可行性依据。

以上为本篇毕业论文范文以颗粒酶B为靶向的磁共振对比剂的制备的介绍部分。

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