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海马齿根系盐诱导基因的克隆与分析

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毕业论文范文题目：海马齿根系盐诱导基因的克隆与分析，论文范文关键词：海马齿根系盐诱导基因的克隆与分析
海马齿根系盐诱导基因的克隆与分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：海马齿(Sesuviumportulacastrum)又名滨水菜,属于双子叶植物纲石竹亚纲番杏科,是一种生长在海边沙地及河流入海口两岸滩涂地带的多年生红树林伴生肉质草本植物,对高盐、干旱和重金属离子具有很高的耐受性。海马齿可以长期在淡水和海水浇灌下正常生长,拥有一套有别于甜土植物的遗传背景和耐盐机制,属于典型的盐生植物。为系统研究海马齿耐盐的分子基础和分子机制,本研究采用水培生根和海水诱导的方式,利用近年发展起来的抑制差减杂交技术(SuppressionSubtractiveHybridization,SSH),构建了海水诱导下海马齿根系差异表达基因cDNA文库。在对差异表达基因EST序列分析的基础上,克隆了海马齿果糖-1,（此处忽略..）6-二磷酸醛缩酶基因,分析了该基因的结构、表达特征及其功能。结果如下:1、成功构建了海水诱导条件下海马齿根系差异表达基因cDNA文库。PCR扩增cDNA文库获得659个单一插入片段阳性重组子克隆,插入片段主要分布在200-800bp之间。利用反向Northern斑点杂交从中筛选到363个海水诱导下强表达的阳性克隆。已经测序的172个阳性克隆中,获得170条单—EST(ExpressedSequeneeTag)。序列分析显示,170条EST可分为胁迫与防御应答相关基因(42个)、未知功能蛋白基因(24个)、细胞代谢和途径相关酶基因(20个)、无匹配序列(20个)、转录调控相关蛋白基因(16个)、细胞信号转导相关蛋白基因(13个)、能量转化相关蛋白基因(6个)、细胞生长和凋亡相关蛋白基因(6个)、蛋白翻译相关基因(5个)和蛋白降解相（略..）关基因(3个)10大类。2、以差减文库中SpSSH89EST序列为基础,利用RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)技术成功克隆了海马齿果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因,命名为SpFBA(GenBank登陆号ACG68894)。(1)序列分析显示,该基因长1452bp,包含一个1071bp的开放阅读框,编码357个氨基酸。推导的SpFBA分子量38.48kDa,等电点6.49。推导的氨基酸序列与冰叶日中花(Mesembranthemumcrystallinum,AAB61592)、菠菜(spinaciaoleracea,CAA46649)、马铃薯(Solanumtuberosum,ABC01905)和鳄梨(PerseaamericanaCAB77243)中的果糖-1,6-二磷酸醛缩酶同源性分别为91%、89%、82%和82%。(2)生物信息学分析表明,Sp（文章此处忽略..）FBA包含1个由十个高度保守氨基酸VLLEGTLLKPN组成的醛缩酶Ⅰ型活性位点和四个N-豆蔻酰化位点,其中Ⅰ型活性位点中存在的亮氨酸残基在酶的催化作用中起着关键作用。细胞定位推测其定位于细胞质中,属Ⅰ型细胞质果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因。(3)利用半定量RT-PCR分析了SpFBA的表达特征。结果显示,SpFBA在根中的表达明显高于茎和叶,海水、NaCl、ABA和干旱(PEG)等非生物胁迫均能在12?时内诱导SpFBA表达量的显著增加,推测该基因属于盐和干旱诱导型基因,参与了对渗透胁迫的应答。(4)构建原核表达载体pET+SpFBA,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。对纯化后重组蛋白的酶活性检测结果表明,原核系统表达的SpFBA重组蛋白具有（此处忽略..）醛缩酶催化活性。pET+SpFBA转基因大肠杆菌的耐盐性测定结果证实,SpFBA基因的表达能够增强宿主菌的耐盐能力。上述结果暗示,SpFBA可能直接参与了海马齿对高盐耐受性的调节,推测其可能作为海马齿糖酵解/糖异生代谢途径中一个关键的可逆调控酶基因,通过调控蔗糖合成途径参与了渗透性的调节。

以上为本篇毕业论文范文海马齿根系盐诱导基因的克隆与分析的介绍部分。

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