携带肝细胞生长因子基因的软骨细胞生物学特性的实验研究

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携带肝细胞生长因子基因的软骨细胞生物学特性的实验研究

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毕业论文范文题目：携带肝细胞生长因子基因的软骨细胞生物学特性的实验研究，论文范文关键词：携带肝细胞生长因子基因的软骨细胞生物学特性的实验研究
携带肝细胞生长因子基因的软骨细胞生物学特性的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：耳廓在人体上仅仅占据很少数的总体表面积,但耳廓却是人体外部最复杂的三维立体结构之一。目前国内文献对先天性外中耳畸形发病率报道为1/7000,男女之比约2：1,双侧者占10%,且右侧畸形较多。目前小耳、耳畸形的重建及创伤后耳的重建仍然是耳鼻喉科医生面临的最大挑战。多年来耳廓软骨的最佳取代物为左冠状动脉前区域的肋软骨,1971年Tanzer提出运用肋软骨作为耳廓支架并分四个阶段进行耳廓重建手术,随着术式越来越标准化,现被大多数国家用于耳廓重建手术[2-7]。然而自体软骨移植后易吸收,同时手术也有着许多不可避免的问题,如手术瘢痕、创伤疼痛及气胸等情况。金属和有机材料支架经历从最初的铁铜合金到乳胶和塑料等,以及后来使用的硅胶,均因为无法满足对身体无不良反应、可塑性及生物相容性原则而未得到广泛的应（此处忽略..）用。随着组织工程技术的不断发展,通过生物组织工程软骨再塑耳廓成为耳廓重建的目标。这其中由于自身软骨组织取材少难以达到所需细胞数量,且体外培养的软骨细胞由于软骨细胞自身的性质易发生“去分化”不能达到组织工程软骨的需要,从而限制了软骨组织工程耳廓重建的发展。本研究将肝细胞生长因子(HGF)利用腺病毒表达载体转染于体外培养的新西兰大白兔耳廓软骨细胞,观察携带HGF基因的耳廓软骨细胞的生物学特性,为后期利用此类细胞应用于构建耳廓软骨组织工程的研究打下基础。第一章兔耳廓软骨细胞的分离及培养本部分的研究目的主要是探讨兔耳廓软骨细胞分离培养的方法和生物学特性。主要通过机械法及酶消化法从2周龄新西兰大白兔的耳廓软骨中分离获得软骨细胞并进行原代和传代培养。在倒置显微镜下观察细胞形（文章此处忽略..）态及其生长情况,并绘制生长曲线,使用甲苯胺蓝异染染色、免疫组化染色等了解其生物学特性。结果显示：兔耳廓软骨细胞体外原代培养形成单层细胞的时间为1周左右,传代培养时间约3至5天。原代细胞以类圆形或多角形形态为主,随着传代的进行,细胞形态向纤维样细胞改变并失去其表型特征。甲苯胺蓝染色证实细胞可合成蛋白多糖,异染反应主要集中在细胞集落样生长区,异染程度以前三代培养明显,随后逐渐减弱。机械法和酶消化法相结合分离获得的细胞活性率达85%以上,Ⅱ型胶原免疫组化染色可见细胞中Ⅱ型胶原含量随着体外培养传代而减少,到5代以后Ⅱ型胶原含量几乎完全丧失。研究结论：采用机械法与酶消化法结合体外培养兔耳廓软骨细胞可获得活性较高的软骨细胞,随着体外传代培养,耳廓软骨的Ⅱ型胶原含量逐渐减少,细胞形态（本文此处忽略..）改变,软骨组织的生物学特性丧失。第二章Ad-HGF对兔耳廓软骨细胞的转染表达及增殖效应本部分的研究目的主要是通过观察腺病毒携带的肝细胞生长因子(Ad-HGF)对兔耳廓软骨细胞的转染表达及增殖效应。实验以不同感染强度(50,100,200)的腺病毒携带的荧光蛋白(Ad-GFP)转染体外培养的新西兰大白兔耳廓软骨细胞,感染后72h用流式细胞仪检测转染效率。并以最佳感染强度的Ad-HGF转染兔耳廓软骨细胞,ELISA方法检测转染48h,72h后细胞上清中HGF的表达水平。MTT法绘制生长曲线,使用Ⅱ型胶原的免疫组化染色了解转染肝细胞生长因子基因的耳廓软骨细胞的生物学特性。实验结果示：Ad-GFP感染强度(MOI)为100时,转染效率达50%。以MOI=100的Ad-HGF转染细胞48h,72h上清中HGF的表达分别为(513±20.77)pg/ml（此处忽略..）和(312.7±23.37)pg/ml。Ad-HGF转染的三代细胞生长曲线较耳廓软骨三代细胞的曲线前移、抬高。Ⅱ型胶原的免疫组化阳性细胞比值在三代细胞,Ad-HGF转染的三代细胞中分别为(0.652±0.0278),(0.682±0.039),p0.05,无差异性；在兔耳廓软骨五代细胞,Ad-HGF转染的五代细胞中分别为(0.23±0.0469),(0.35±0.0367),p0.05。实验结果示：Ad-HGF可有效转染兔耳廓软骨细胞且持续表达HGF,HGF对体外培养的兔耳廓软骨细胞有促增殖、维持其生物学特性的作用。

以上为本篇毕业论文范文携带肝细胞生长因子基因的软骨细胞生物学特性的实验研究的介绍部分。

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