禽致病性大肠杆菌鸭源分离株侵袭相关基因致病机理研究

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禽致病性大肠杆菌鸭源分离株侵袭相关基因致病机理研究

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毕业论文范文题目：禽致病性大肠杆菌鸭源分离株侵袭相关基因致病机理研究，论文范文关键词：禽致病性大肠杆菌鸭源分离株侵袭相关基因致病机理研究
禽致病性大肠杆菌鸭源分离株侵袭相关基因致病机理研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：禽的大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(AvianpathogenicEscherichiacoli,APEC)引起的一种常见的细菌性疾病,对养禽业危害极大,同时具有公共卫生意义。新生儿脑膜炎大肠杆菌(NeonatalmeningitisE.coli,NMEC)是导致新生儿脑膜炎主要病原菌之一,目前在NMEC的研究中,已确定ibeA、ibeB、yijP、aslA、ypdP和ompA等多个基因与其穿越血脑屏障有关。APEC和NMEC在基因组结构上很相似,且具有很多相同的毒力因子。侵袭并穿越血脑屏障是细菌导致脑膜炎的关键步骤,（文章此处忽略..）侵袭相关基因ibeB、yijP在APEC中广泛分布,显示其具有重要的公共卫生意义。根据已登陆GenBank的侵袭相关基因ibeB、yijP的序列,设计并合成两对引物,检测ibeB、yijP基因在100株不同来源、不同地区大肠杆菌中的分布,结果表明,所有菌株都含有ibeB、yijP基因。以APEC鸭源株DE205B株基因组为模板PCR扩增ibeB和yijP开放阅读框,连接pMD18-T载体后测序。将测序结果与GenBank中APECO1、BL21(DE3)、CFT073、RS218、UT189、O157:H7菌株进行比对和进化树分析。结果显示,DE205B的ibeB、yi（此处忽略..）jP基因与上述菌株有较高同源性,同源率在96.9%-100%之间。对不同菌株的ibeB和yijP基因进行进化树分析表明,DE205B与APECO1、RS218、UT189同处于一个小进化分枝中,亲缘关系较近；与O157:H7、BL21(DE3)亲缘关系较远,与CFT073的亲缘关系介于前两个类群之间。将DE205B的ibeB和yijP基因全长序列定向克隆于经同样酶双酶切的pET-32a(+)中,转化表达宿主菌BL21(DE3).经IPTG诱导可表达分子量约69.3kDa、83.4kDa的IbeB、YijP重组蛋白。超声破碎,裂解物作SDS-PAGE凝胶电泳,显示两个蛋白条带,均存在于包涵体。免疫转印结果显（略..）示,IbeB、YijP重组蛋白都能被DE205B全菌抗血清识别,表明二者具备免疫原性。蛋白经镍柱纯化、透析脱盐复性,分别免疫新西兰大白兔,获得效价较高的免疫血清。侵袭抑制试验证明,免疫血清能抑制DE205B对DF-1细胞的侵袭。为进一步研究ibeB基因的功能,利用Red重组系统构建DE205BibeB基因缺失株及其互补株。对野生株、缺失株、互补株的生物学特性进行分析,结果显示,ibeB缺失株对小鼠及雏鸭的致病力低于野生株,且互补株的致病力高于缺失株,提示ibeB在APEC的致病过程中发挥一定作用。ibeB缺失株对DF-1细胞和脑组织（此处忽略..）的侵袭能力显著低于野生株(P0.05),且互补株的侵袭能力显著高于缺失株(P0.05),提示ibeB基因在APEC侵袭细胞并穿透血脑屏障过程中发挥一定作用。ibeB缺失株中ibeA基因的相对表达率低于野生株,且互补株中ibeB基因的相对表达率高于缺失株,提示ibeB基因可能通过调控ibeA基因的表达水平影响APEC的致病能力。

以上为本篇毕业论文范文禽致病性大肠杆菌鸭源分离株侵袭相关基因致病机理研究的介绍部分。

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