EGCG对糖尿病肾病的保护作用及其机制探讨

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EGCG对糖尿病肾病的保护作用及其机制探讨

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毕业论文范文题目：EGCG对糖尿病肾病的保护作用及其机制探讨，论文范文关键词：EGCG对糖尿病肾病的保护作用及其机制探讨
EGCG对糖尿病肾病的保护作用及其机制探讨毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：随着经济发展和生活方式改变,糖尿病患病率逐渐上升,糖尿病及其并发症已成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。糖尿病肾病作为糖尿病并发症之一,严重影响了患者的生活质量。目前对糖尿病慢性并发症发病机理进行的研究日益增多,氧化应激作为其发病机制之一,受到广泛的关注。目前认为糖尿病患者和糖尿病模型中均存在氧化应激。活性氧除可直接损伤肾脏组织外,还是许多细胞因子损伤肾组织的最终介质,甚至可作为信号分子,激活细胞内信号转导通路。因此,在临床工作中选用合适的抗氧化剂以延缓糖尿病肾病的发生、发展具有重要的临床意义。茶是日常生活中备受人们喜爱的饮料之一,是由山茶科植物芽叶加工制成的。茶叶中富含茶多酚类物质,众多研究已证实茶多酚具有清除自由基、抗脂质过氧化、抗突变、抗肿瘤、抗炎、抗病毒和增强机体免疫功能等多种生物学活性和药理效应。其中起主要作用的活性成分是表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG),是目前已知的抗氧化作用最强的自由基清除剂之一。其抗氧化机制主要包括两方面:一方面,以电子供体的形式直接中和羟自由基和过氧自由基;另一方面,通过激活谷胱甘肽过氧化酶、抑制一氧化氮合酶活性起间接抗氧化作用。最近研究发现体内存在EGCG受体,即层粘连蛋白受体(LR),多种细胞都存在LR结合位点,EGCG不仅能通（略..）过LR与靶细胞作用,还能通过LR与其他受体的相互作用而发挥效应。本研究运用多种实验技术和方法,旨在阐明以下几个问题:1.EGCG对糖尿病大鼠肾脏有无保护作用;2.通过体内、外实验探讨糖尿病状态下抗氧化酶活性和脂质过氧化物含量的变化及EGCG干预后的效果;3.通过体内、外实验探讨糖尿病状态下细胞外调节蛋白激酶(ERK)和周期素激酶抑制剂p27(p27)表达量的改变及EGCG干预后的变化。主要方法和结果:第一部分:EGCG对糖尿病大鼠肾脏的保护作用方法:3月龄SD大鼠给予链脲佐菌素(STZ,65mg/kg)腹腔注射,诱导建立糖尿病模型。实验分成4组:(1)正常对照组(CN);(2)糖尿病模型组(DM);(3)EGCG干预组I(DM模型建立后第一周EGCG干预,腹腔注射EGCG5mg/kg·d);(4)EGCG干预II(DM模型建立后第三周EGCG干预,腹腔注射EGCG5mg/kg·d)。检测成模后第4w、8w、12w时24h尿蛋白排泄率,12w时处死大鼠测定血糖、血总胆固醇、血肌酐,计算肾重/体重比值、电镜检查、HE染色、PAS染色光镜下运用半自动图像分析系统测量肾小球平均截面积,并计算肾小球平均体积作为形态学指标。结果:EGCG早期干预可使糖尿病大鼠血糖、血总胆固醇和血肌酐降低,还可使糖尿病大鼠尿蛋白排泄量减少,肾重/体重比值降低,电镜显示肾小球基底膜增厚减轻、足突融合现象减少,系膜区PAS阳性物质沉积程度减轻,（此处忽略..）肾小球面积减少,肾小球内细胞数减少。而在糖尿病肾脏已出现形态学改变时即成模第3w后给药,其干预效果较差。第二部分:EGCG对糖尿病大鼠及高糖环境下肾系膜细胞氧化应激和同型半胱氨酸(Hcy)的影响方法:1.体内实验部分:各组大鼠予成模后第4w、8w、12w时尾静脉取血,比色法测定糖尿病大鼠红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、全血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、血浆丙二醛(MDA)含量作为氧化应激状态的检测指标;第12w处死,取肾脏组织,制备匀浆,测定大鼠肾脏SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量作为肾脏局部氧化应激状态的检测指标,同时测定血浆同型半胱氨酸含量。2.体外实验部分:选用大鼠肾系膜细胞株,分组:正常对照组(NG,葡萄糖5mmol·L~(-1)),高糖组(HG,葡萄糖30mmol·L~(-1)),HG+EGCG(100μg·L~(-1))组,HG+EGCG(200μg·L~(-1))组,HG+EGCG(400μg·L~(-1))组,甘露醇组(5mmol·L~(-1)葡萄糖+25mmol·L~(-1)甘露醇)。培养48h后,观察培养液中抗氧化酶活性和脂质过氧化物水平的改变及EGCG处理后的影响。结果:1.体内实验结果:与CN组大鼠比较,DM组大鼠肾皮质MDA含量明显增加,而肾皮质内抗氧化酶(AOEs)包括SOD、GSH-Px活性明显降低。EGCG干预可使糖尿病大鼠肾脏SOD和GSH-Px活性明显增加,并使肾皮质MDA含量降低。其作用效应与给药（略..）时机和疗程呈正相关。同时DM组大鼠的血浆MDA水平明显升高,并伴有红细胞SOD活性下降,此现象随病程延长有逐渐加重的趋势,早期接受EGCG干预的糖尿病大鼠上述改变明显改善。糖尿病模型组血浆同型半胱氨酸含量增加,而经EGCG干预后可下降。2.体外实验结果:大鼠肾系膜细胞处于高糖环境中时,MDA含量明显增多、SOD活性和GSH-Px活性有所下降。经EGCG处理后可使SOD活性升高,增加EGCG剂量后使SOD活性进一步升高,并能使GSH-Px活性升高,MDA含量降低。第三部分:EGCG对糖尿病大鼠及高糖环境下肾系膜细胞P27和ERK的作用方法:1.体内实验部分:各组大鼠于12w处死,取肾组织行pERK免疫组化染色。2.体外实验部分:选用大鼠肾系膜细胞株,将其分为:正常对照组(NG,葡萄糖5mmol·L~(-1)),高糖组(HG,葡萄糖30mmol·L~(-1)),HG+EGCG(100μg·L~(-1))组,HG+EGCG(200μg·L~(-1))组,HG+EGCG(400μg·L~(-1))组,甘露醇组(5mmol·L~(-1)葡萄糖+25mmol·L~(-1)甘露醇)培养48h后,MTT法测定细胞增殖情况,Westernblot检测ERK、pERK和p27蛋白表达水平。结果:1.体内实验部分:免疫组化检测结果显示CN组pERK表达较少,阳性染色部位主要位于胞浆;DM组大鼠免疫组化染色明显增强,在肾小球和肾小管均有pERK蛋白表达增强;E（略..）GCG干预后,pERK蛋白免疫组化染色明显减弱,尤以干预组?为明显。2.体外实验部分:大鼠系膜细胞处于高糖环境时,系膜细胞增殖明显,pERK和p27蛋白表达上调;经EGCG处理后,系膜细胞增殖明显减轻,pERK和p27蛋白表达下降,并呈剂量依赖性。结论:1.EGCG能有效纠正糖尿病大鼠糖代谢、脂质代谢紊乱,改善肾功能,延缓肾小球硬化的进展,具有一定的肾保护作用。2.肾组织过氧化产物堆积、内在抗氧化酶活性降低在糖尿病的发生发展中起着重要作用,而EGCG能有效抑制糖尿病大鼠肾脏氧化应激反应;EGCG可改善高糖环境下大鼠肾系膜细胞的氧化应激状态。3.糖尿病大鼠肾组织pERK蛋白水平升高是糖尿病进展的重要因素之一,p27蛋白表达上调是高糖环境下系膜细胞肥大增殖的机制之一。EGCG能抑制糖尿病大鼠肾脏pERK蛋白水平,并能抑制高糖环境下系膜细胞pERK和p27蛋白水平。

以上为本篇毕业论文范文EGCG对糖尿病肾病的保护作用及其机制探讨的介绍部分。

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