腺病毒介导人VEGF-siRNA对骨肉瘤细胞MG63增殖和凋亡的影响研究

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腺病毒介导人VEGF-siRNA对骨肉瘤细胞MG63增殖和凋亡的影响研究

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腺病毒介导人VEGF-siRNA对骨肉瘤细胞MG63增殖和凋亡的影响研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的本研究设计合成针对VEGF的小分子干扰RNA，构建其腺病毒真核表达载体，观察Ad-VEGF-siRNA对骨肉瘤细胞MG63增殖和凋亡的影响及其对肿瘤生长的抑制作用，探讨其作用机制、主要的作用环节和对骨肉瘤临床治疗的意义。方法1．利用病毒重组技术将靶向VEGF的小干扰RNA克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中，利用MTT法、细胞免疫组化技术、Hoechst染色、流式细胞技术，观察体外转染后肿瘤细胞的（略..）增殖、凋亡情况。2．建立荷人骨肉瘤的裸鼠动物模型，瘤内注射携带靶向VEGF小干扰RNA的重组腺病毒，通过免疫组化和图像分析技术、电子显微镜技术，分析基因治疗后裸鼠肿瘤组织中细胞增殖和凋亡相关基因PCNA、Bcl-2的表达及肿瘤细胞的凋亡情况。结果MTT法显示Ad-VEGF-siRNA对MG63细胞生长有明显的抑制作用，并随MOI值增加和作用时间延长而增强(P＜0.01)，而Ad-EGFP组和PBS组对细胞增（略..）殖无抑制作用。流式细胞仪测定Ad-VEGF-siRNA组细胞凋亡率增加(P＜0.01)，并随MOI值增加和作用时间延长凋亡率增加。细胞免疫组化显示，Ad-VEGF-siRNA作用24h，PCNA表达受到抑制，48h抑制作用较24h有所增强；Ad-VEGF-siRMA作用24h，Bcl-2表达未受到抑制，48h抑制作用较24h有所增强，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01)。Hoechst染色Ad-VEGF-siRNA组凋亡细胞多（本文此处忽略..）见，并随MOI值增加和作用时间延长凋亡细胞数相应增加。裸鼠移植瘤实验表明，Ad-VEGF-siRNA组致瘤性显著降低(接种16天后，Ad-VEGF-siRNA组、Ad-EGFP组和PBS组的肿瘤体积分别为0.91±0.05cm~3、1.53±0.17cm~3、和1.56±0.12cm~3，抑瘤率达40.7％)，表现为裸鼠皮下移植瘤生长速率较慢，肿瘤体积小，倍增时间长。Tunel染色和透射电镜均显示肿瘤细胞凋亡增加，免疫组化提示肿瘤组织中PCNA（此处忽略..）、Bcl-2表达明显减少(P＜0.01)。结论腺病毒介导的VEGF-siRNA可在靶细胞中产生高丰度的小干扰RNA，高效而特异地阻断VEGF基因表达，有效抑制肿瘤细胞的增殖，促进肿瘤细胞的凋亡，使得肿瘤生长减缓，为抗血管生成治疗实体瘤的临床应用奠定理论基础。

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