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新生儿HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性研究
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新生儿HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性研究
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新生儿HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性研究
新生儿HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】
:目的采集正常产妇脐血进行HCMV系列实验室检测,分析正常产妇分娩新生儿的HCMV先天性感染率。同时应用流式细胞术检测正常产妇脐血中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分比,并计算CD4+∕CD8+的比值,探讨HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性,进一步结合追踪患儿的临床表现,为HCMV先天性感染的有效预防和免疫治疗及临床妊娠干预提供科学依据。方法自2009年12月~2011年3月于合肥市妇幼保健院采集正常产妇36例脐血标本,按实验设计分别作如下处理:(1)HCMV病毒分离:取2ml脐血抗凝血,分离白细胞后接种到人胚肺成纤维细胞(HELF)培养物上,逐日于倒置显微镜下观察HCMV致细胞病变效应(Cytopathiceffect,CPE);(2)从分离的脐血白细胞中提取总DNA分别进行巢式PCR法和荧光定量PCR法检测;(3)将分离的脐血白细胞进行HCMV-pp65抗原血症检测;(4)从36例脐血标本中分别取0.5ml脐血,采用流式细胞术检测脐血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的百分比,并计算CD4+∕CD8+的比值,结合追踪患儿的临床表现,分析新生儿HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性;(5)将巢式(文章此处忽略..)PCR扩增后的阳性标本测序,并与基因数据库序列比对,进一步证实巢式PCR扩增产物是HCMVgB基因。结果(1)病毒分离:分别将36份脐血白细胞接种于HELF细胞培养物上,盲传三代有5份标本出现HCMV特征性CPE,病毒分离率为13.9%(5∕36);(2)HCMV-pp65抗原血症检测有6份为阳性,阳性率为16.7%(6∕36),与病毒分离一致率为97.2%,其中共同阳性一致率为83.3%;(3)巢式PCR法检测结果:将36份脐血标本中提取的DNA分别进行HCMVUL55基因巢式PCR扩增,HCMVUL55DNA的阳性率为22.2%(7∕36),与病毒分离一致率为94.4%,其中共同阳性一致率为71.4%;(4)荧光定量PCR检测结果:将36份脐血标本中提取的DNA分别取2μl进行荧光定量PCR扩增,根据试剂盒规定的阳性结果判定标准,荧光定量PCR法检测HCMV-DNA的阳性率为30.6%(11∕36),与病毒分离一致率为83.3%,其中共同阳性一致率为45.5%;(5)巢式PCR扩增产物的测序结果:巢式PCR阳性标本测序结果与设计的序列相一致,并与基因数据库序列比对,证明为HCMVgB2型。(6)流式细胞术检测T淋巴细胞亚群变化的结果:脐血标本中荧光定量PCR阳性组与荧光定量PCR阴性组CD_3~+淋巴细胞含量分别为(73.11±8.88)%和(此处忽略..)(71.66±8.59)%,差异无统计学意义(P﹥0.05);荧光定量PCR阳性组与荧光定量PCR阴性组CD_4~+淋巴细胞含量分别为(47.52±8.53)%和(52.476±7.25)%,差异无统计学意义(P﹥0.05),但荧光定量PCR阳性组CD_4~+淋巴细胞含量与荧光定量PCR阴性组相比较,有下降趋势;荧光定量PCR阳性组与荧光定量PCR阴性组CD_8~+淋巴细胞含量分别为(25.84±4.75)%和(18.07±4.06)%,荧光定量PCR阳性组CD_8~+淋巴细胞含量高于荧光定量PCR阴性组且差异有统计学意义(P﹤0.01);荧光定量PCR阳性组与荧光定量PCR阴性组CD_4~+∕CD_8~+比值分别为1.89±0.45和3.026±0.75,荧光定量PCR阳性组CD_4~+∕CD_8~+比值低于荧光定量PCR阴性组且差异有统计学意义(P﹤0.01)。(7)结合新生儿临床出生资料发现,有一例HCMV先天性活动性感染新生儿表现为宫内发育迟缓,其HCMV病毒分离、HCMV-pp65抗原血症检测、HCMVUL55基因巢式PCR检测和HCMV-DNA荧光定量PCR检测均为阳性,CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+T淋巴细胞含量分别为66.4%、36.2%、29.5%,CD_4~+∕CD_8~+比值为1.21。结论(1)根据病毒分离结果作为“金标准”,初步确认判定HCM(此处忽略..)V先天性活动性感染的指标是:经测序证实的PCR检测HCMVIE、UL83基因阳性和巢式PCR检测UL55基因阳性及HCMV-pp65抗原血症阳性者。(2)通过对36份正常产妇脐血标本进行病毒分离、HCMV-pp65抗原血症检测、HCMVUL55基因巢式PCR检测和HCMV-DNA荧光定量PCR检测,并比较,本次研究中正常产妇分娩的新生儿HCMV先天性感染率为30.6%,其中,HCMV先天性活动性感染率为16.7%。(3)利用流式细胞术测定36份脐血标本中T淋巴细胞亚群CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+的百分比,并计算CD_4~+∕CD_8~+的比值。发现荧光定量PCR阳性组CD_4~+淋巴细胞含量与荧光定量PCR阴性组相比较,有下降趋势;荧光定量PCR阳性组CD_8~+淋巴细胞含量高于荧光定量PCR阴性组且差异有统计学意义(P﹤0.01);荧光定量PCR阳性组CD_4~+∕CD_8~+比值低于荧光定量PCR阴性组且差异有统计学意义(P﹤0.01)。并且发现一例HCMV先天性活动性感染的新生儿出生时体重下降。分析发现,该新生儿的检测结果符合先天性活动性感染的判定指标,并且有CD_8~+淋巴细胞的百分比升高,CD_4~+∕CD_8~+(略..)比值下降,提示机体的细胞免疫功能降低,表明HCMV先天性活动性感染与脐血T淋巴细胞亚群即机体细胞免疫应答状态的改变密切相关。(4)36例被检测新生儿中有一例新生儿出生时体重仅2.2千克,符合宫内发育迟缓的诊断标准。表明迫切需要尽快建立随访档案,定期对HCMV先天性活动性感染的新生儿上门体检。
以上为本篇毕业论文范文
新生儿HCMV先天性感染与T淋巴细胞亚群变化的相关性研究
的介绍部分。
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