轮状病毒减毒活疫苗滴度测定方法研究及血清RV-IgA诊断试剂研制

搜索高级搜索

原创毕业论文

轮状病毒减毒活疫苗滴度测定方法研究及血清RV-IgA诊断试剂研制

作者: 浏览:6次

免费专业论文
政治工作论文
计算机论文
营销专业论文
工程管理论文范文
医药医学论文范文
法律论文范文
生物专业论文
物理教学论文范文
人力资源论文范文
化学教学论文范文
电子专业论文范文
历史专业论文
电气工程论文
社会学专业论文
英语专业论文
行政管理论文范文
语文专业论文
电子商务论文范文
焊工钳工技师论文
社科文学论文
教育论文范文
数学论文范文
物流论文范文
建筑专业论文
食品专业论文
财务管理论文范文
工商管理论文范文
会计专业论文范文
专业论文格式
化工材料专业论文
英语教学专业论文
电子通信论文范文
旅游管理论文范文
环境科学专业论文
经济论文
人力资源论文范文
营销专业论文范文
财务管理论文范文
物流论文范文
财务会计论文范文
数学教育论文范文
数学与应用数学论文
电子商务论文范文
法律专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文
计算机专业论文
教育管理论文范文
现代教育技术论文
小学教育论文范文
机械模具专业论文
报告,总结,申请书
心理学论文范文
学前教育论文范文

收费计算机专业论文范文

收费计算机专业论文
Delphi
ASP
VB
JSP
ASP.NET
VB.NET
java
VC
pb
VS
dreamweaver
c#.net
vf
VC++
计算机论文

毕业论文范文题目：轮状病毒减毒活疫苗滴度测定方法研究及血清RV-IgA诊断试剂研制，论文范文关键词：轮状病毒减毒活疫苗滴度测定方法研究及血清RV-IgA诊断试剂研制
轮状病毒减毒活疫苗滴度测定方法研究及血清RV-IgA诊断试剂研制毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起婴幼儿重症腹泻最重要的病原,预防性疫苗的开发方兴未艾,有的已经上市。然而疫苗质量控制研究却略显滞后,轮状病毒减毒活疫苗的质量控制指标主要包括病毒滴度测定和免疫效果评价。本研究就这两个方面进行探讨,第一部分拟建立一种能够适用于不同轮状病毒减毒活疫苗的滴度测定方法;第二部分为研制血清抗轮状病毒IgA(RV-IgA)的诊断试剂,为轮状病毒疫苗的质控打下基础。在活病毒滴度测定中,一般认为蚀斑法是经典且准确的方法,但蚀斑法是否可以作为轮状病毒疫苗滴度测定的常规方法以及如何进行轮状病毒疫苗的蚀斑法实验,目前的研究报道极少。本课题采用已上市的三种轮状病毒疫苗—葛兰素史克公司的人减毒活疫苗(Rotarix)、默沙东公司的人—牛五价重配苗(RotaTeq)和兰州生物制品研究所的羊减毒活疫苗(LLR)作为实验病毒株,研究了蚀斑法测定轮状病毒疫苗滴度的实验方法。将疫苗10~4倍稀释并经胰蛋白酶活化后感染细胞,用单因素改变法对各种实验条件进行优化。改变的因素有:1.细胞;2.琼脂浓度;3.琼脂覆盖物体积;4.中性（本文此处忽略..）红过滤方法;5.中性红浓度;6.DEAE-葡聚糖浓度。结果显示,该方法的最佳实验条件如下:1.使用MA104细胞;2.第一、二层琼脂终浓度均为0.8%;3.第一、二层琼脂覆盖物体积均为2.5ml;4.中性红通过滤纸过滤;5.中性红终浓度为0.012%;6.第一层琼脂覆盖物中DEAE-葡聚糖的浓度为100μg/ml。对于轮状病毒减毒活疫苗的滴度测定,目前国内外采用的方法各不相同,使得国际或国家参考品的研制推广遇到很大困难,并且各种方法滴度表示单位的不同也使监管部门和用户混淆了对不同厂家的疫苗病毒滴度的认识,同时现有的滴度测定方法也缺少经典蚀斑法的验证。本研究采用50%细胞培养感染量(CCID_(50))联合细胞染色的方法进行疫苗滴度测定。将活化的疫苗经倍比稀释后感染细胞,用轮状病毒A组特异性抗体—病毒蛋白VP6的单克隆抗体(McAb)与细胞中的病毒结合,然后加入辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)标记的羊抗鼠IgG,再通过底物联苯二胺(DAB)进行显色。同样以Rotarix、RotaTeq和LLR做为实验病毒株,将其10~4倍稀释并用胰蛋白酶活化后感染（文章此处忽略..）细胞,采用单因素改变法对各种实验条件进行优化。这些因素包括1.VP6单抗浓度;2.HRP标记的羊抗鼠IgG浓度;3.病毒孵育时间。结果显示,最佳实验条件为:1.VP6单抗为10gg/ml;2.HRP标记的羊抗鼠IgG的工作浓度为10μg/ml;3.病毒孵育时间为5天。为了验证建立的CCID_(50)联合细胞染色滴度测定方法的准确性,我们分别用CCID_(50)联合细胞染色法和蚀斑法测定3批RotaTeq和11批LLR,对两种方法的实验结果进行相关分析。结果显示,CCID_(50)联合细胞染色法的实验结果与蚀斑法的具有较强的相关性(P＜0.05),这两种方法在RotaTeq苗和LLR苗上的相关系数(γ)分别为1.0000和0.8272,说明CCID_(50)联合细胞染色法的实验结果准确可靠。另外,分别用CCID_(50)联合细胞染色法和蚀斑法测定了3个批号的RotaTeq及2个批号的LLR疫苗,CCID_(50)联合细胞染色法测定RotaTeq和LLR的结果变异系数分别为1.28%和3.41%,而蚀斑法测定RotaTeq和LLR的结果变异系数(CV)分别为3.67%和4.78%,表明CCID_(50)联合细胞染色法的精密性优于蚀斑法。对于轮状病毒疫苗的免疫效（本文此处忽略..）果评价,目前较为公认的实验室评价方法为测定受免者血清中的RV-IgA水平变化,但世界上尚无成熟技术和商品化的RV-IgA试剂盒。本研究的第二部分即为研制血清RV-IgA的诊断试剂,以期解决我国没有试剂用于轮状病毒疫苗临床评价的瓶颈问题。采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以LLR疫苗作为抗原包被酶标板,以HRP标记的羊抗人IgA作为酶标二抗。通过测定RV-IgA阳性血清和阴性血清,根据实验结果的符合率对包被温度和封闭液配方进行了优化,最后采用4℃过夜包被程序,而封闭液的最佳配方为含2%BSA、0.05%Tween-20的PBS。通过方阵滴定法选择最佳包被抗原浓度和酶标二抗的工作浓度,结果显示包被抗原的最佳稀释比例为1:4,酶标二抗的最佳工作浓度为0.51μg/ml。对87份脐带血的测定确定该试剂盒的阳性判定值(Cutoff值)为0.105。通过重复测定高、中、低三个浓度的血清,板间和板内的变异系数均低于15%,说明该试剂盒具有良好的精密性。随后对该试剂盒进行了初步的临床应用,我们测定了100份来自江西儿童医院检验科的血清,结果99份为RV-IgA阳性,（本文此处忽略..）1份阴性。用WB对从中随机抽取的10份阳性血清及1份阴性血清进行验证,其结果与我们所研制的RV-IgA诊断试剂完全一致。说明该试剂结果较为准确,有望用于轮状病毒疫苗的临床评价工作。本课题研究轮状病毒疫苗滴度测定的蚀斑技术,一方面解决疫苗滴度缺少经典方法的问题,一方面通过蚀斑法验证评价新的滴度测定方法。应用组特异性抗体和细胞微孔染色技术,建立适用于不同厂家生产的疫苗滴度测定的CCID_(50)联合细胞染色法,为国际或国家滴度测定用参考品的建立和推广奠定了基础。制备了RV-IgA检测试剂盒,解决评价疫苗的血清学免疫效果工作中缺乏实验室指标测定用试剂的问题。

以上为本篇毕业论文范文轮状病毒减毒活疫苗滴度测定方法研究及血清RV-IgA诊断试剂研制的介绍部分。

本论文在法律论文栏目，由论文网(www.zjwd.net)整理,更多论文,请点论文范文查找