兔眼IPE跟RPE细胞膜的K-NPPase酶组织化学的电镜图像分析

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兔眼IPE跟RPE细胞膜的K-NPPase酶组织化学的电镜图像分析

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毕业论文范文题目：兔眼IPE跟RPE细胞膜的K-NPPase酶组织化学的电镜图像分析，论文范文关键词：兔眼IPE跟RPE细胞膜的K-NPPase酶组织化学的电镜图像分析
兔眼IPE跟RPE细胞膜的K-NPPase酶组织化学的电镜图像分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：前言虹膜色素上皮(IPE)细胞与视网膜色素上皮(RPE)细胞存在雷同的胚胎发育来源，基本具备RPE细胞的生理功能，且取材便利，可望代替RPE细胞实现自体移植，医治老年性黄斑变性(ARMD)等疾病。近年来，国内外学者缭绕构建光感触器复合体所须要的RPE细胞的四项生理功能进行大量研究，在IPE细胞跟RPE细胞之间进行了大量的比较研究，研究表明在摄取、储存跟代谢维生素A、吞噬视杆细胞外节盘膜(ROS)、分泌细胞外间质的多种细胞因子这三个方面，IPE细胞与RPE细胞有很多类似之处，可能代替RPE。然而在物质转运功能方面对RPE跟IPE细胞比较研究较少。畸形物质转运功能是细胞行使其它生理功能的前提与基本，在IPE细胞跟RPE细胞之间进行物质转运功能的比较对IPE是否代替RPE移植存在重要意思。在物质转运功能中，Na~+，K~+-ATPase是细胞进行物质转运的原能源，在不同的组织，其表白跟分布有很大差别。RPE细胞（此处忽略..）的Na~+，K~+-ATPase分布于RPE顶端与视杆细胞外节盘膜(ROS)连接处的微绒毛膜上密度最高，与电解质，氨基酸，葡萄糖，水等物质在视网膜跟脉络膜之间的转运密切相干；IPE细胞的Na~+，K~+-ATPase分布尚未见报道。本实验中钾依附性对硝基苯磷酸酶（K－NPPase）是Na”，K”－ATPase中钾离于依附性脱磷酸反应的部分，它的活性与Na“，K＼ATPase活性密切相干。目标本研究采取KNPPase酶组织化学技巧，对兔眼IPE细胞跟RPE细胞的Na”，K“eTPase进行足位，利用Metamorph图像分析体系对电镜图像中K－NPPase组化颗粒进行定量分析比较，比较IPE细胞与RPE细胞膜LNa”，K”eTPase的分布情况，为IPE细胞在物质转运方面是否代替RPE细胞行使功能提供实际根据。材料与方法1．实验动物：抉择健康有色素家兔与无色素（白色）家兔各6只，共门只（由中国医科大（本文此处忽略..）学实验动物部提供人体重2．5上对Kg，均匀兔龄6个月，雌雄不限。分组设计为有色素组12只眼跟无色素组12只眼；有色素组跟无色素组又分辨分为IPE组跟RPE组各12例，在组与组之间进行穿插比较，最掉队行总的IPE组跟RPE组的比较。2．标本制造：耳缘静脉打针5刀ml空气处死后，无菌操作下摘取家兔双眼球。用4％多聚甲醛跟0．5％戊二醛混淆液（含6％蔗糖）球内灌注及浸泡固定，4OC，45分钟，将组织切成ZmmX4mm的薄块。3．K－NPPaSS酶组化孵育液面制：耿于1＊＊工甘氨酸一＊＊HfR冲液…＊二9对川’参加主旋·2·咪华6刀Zing及对硝基苯磷酸加g盐p4mg，充分混匀溶解，缓缓滴入DMSO2．sml。b．将构檬酸铅溶于50mmol／L的KOH溶液中配成4刀mmol／L浓度的溶液，摇匀使之溶解。c．将b步骤所配制的构檬酸铅一KOH溶液迟缓滴入a步骤所配制的溶液中，终极孵有液呈半透明微绿色。4．K－NPPase酶组化孵育：将组织薄块浸入孵胄液，青于37O（文章此处忽略..）C温箱中，孵育40～50min。5．电镜察看：将孵育后的组织薄块用100mmol多少iL十肿酸缓冲液洗涤smin；置于1％俄酸司二甲肿酸缓冲液中固定30min；用100M二甲月酸缓冲浪冲刷两次，各5分钟；顺次用50o刁0o七0oq0o45o刁o浓度酒精梯度脱水，各30min，再用100o丙酮浸两次，各30min；环氧树脂（Epon812浸透、包埋、聚合；切半薄切片后在光镜下定位，修块：超薄切片700A，醋酸双氧铀电于染色10分钟，烘干；电镜察看，主照。6．成果分析：采取Metamorph／DP旧体系分析电镜照片。随机选取IPE细胞膜上K－NPPase的阳性颗粒以及RPE细胞顶端跟ROS相接的微绒毛上的阳性颗粒相邻两点间的间隔进行测量。打算每例样本的均值士标准差（无土S）①5％可托区间），通过t测验进行统计学分析，分辨对有色素组跟无色素组的IPE组与RPE组数据进行比较，最后再对总的IPE组跟RPE组数据进村比较。·3·成果电镜察看：IPE细胞膜与RPE细胞顶端微绒毛膜（文章此处忽略..）上均可见K．NPPase颗粒沉积。有色素组PE组与RPE组KNPPase沉积颗粒间间隔经统计学比较无明显性差别，O．5＞P列二；无色素组1＊E组与RPE组KNPPase沉积颗粒间间隔经统计学比较有明显性差别，＊刀刀01：有色素组与无色素组汇总后的1＊E组跟RPE组广＊田防e沉积颗粒间间隔经统计学比较无明显性差别，0．5＞P＞0．2。论断兔眼IPE细胞膜名义与RPE细胞顶端微绒毛膜名义均有Na”，K”－ATPase分布，有色素组与无色素组汇总后的IPE组跟RPE组KNPPase沉积颗粒间间隔经统计学比较无明显性差别，0．5＞P＞0．2，表明用K－NPPSSe酶组化电镜察看到的IPE细胞与RPE细胞存在类似的物质转运功能。

以上为本篇毕业论文范文兔眼IPE跟RPE细胞膜的K-NPPase酶组织化学的电镜图像分析的介绍部分。

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