微孔板式化学发光酶联免疫法检测金黄色葡萄球菌肠毒素B方法的树

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微孔板式化学发光酶联免疫法检测金黄色葡萄球菌肠毒素B方法的树

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毕业论文范文题目：微孔板式化学发光酶联免疫法检测金黄色葡萄球菌肠毒素B方法的树，论文范文关键词：微孔板式化学发光酶联免疫法检测金黄色葡萄球菌肠毒素B方法的树
微孔板式化学发光酶联免疫法检测金黄色葡萄球菌肠毒素B方法的树毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcalenterotoxin,SE)是金黄色葡萄球菌分泌的细菌外毒素。SE重要分为SEA、SEB、SEC、SED、SEE五型,SEC可分为SEC1、SEC2跟SEC3三种亚型。有学者将中毒性休克综合征毒素(toxicshocksyndrometoxin1,TSST-1)称为SEF。SE各型的分子量相近,约为26~30kDa,在高温前提下跟经过蛋白水解酶的作用后,SE仍可保持生物学活性。各型SE在构造跟功能上存在类似性。跟着新的检测技巧的发展跟利用,一些新型SE或与SE引起的食品中毒有密切相干的毒素接踵被发明。肠毒素是根据其引起呕吐的性质来命名的,已经断定与呕吐反应有关的新型肠毒素分辨是SEG、SEH跟SEI,另有与SE食品中毒有密切相干的毒素(SEJ、SEK、SEL、SEM、SEN、SEO、SEP、SEQ、SER、SEU跟SEV),其致吐作用尚未断定,这些相干毒素被命名为“staphylococcalenterotoxin–like(SEl)SAgs”,即“金黄色葡萄球菌肠毒素样超抗原”,上述相干毒素可称为SElJ-SElV。SE最凸起的特点是存在超抗原活性。超抗原(Su（此处忽略..）perantigen,SAg)指存在丝裂原作用,仅须要极低浓度(1~10ng/ml)就可能激活2%~20%T细胞克隆,使淋巴细胞增殖,产生极强的免疫应答的一类抗原。SAg可分为T细胞超抗原跟B细胞超抗原。T细胞超抗原可根据其作用的T细胞受体类型分为TCRγδ型超抗原跟TCRαβ型超抗原,SE属于TCRαβ型超抗原。SE对免疫体系有免疫激活作用,其分子的一端与抗原提呈细胞上MHCⅡ类分子抗原结合沟槽α螺旋的外侧结合,另一端同T细胞名义TCR的某些Vβ基因编码片段结合,构成MHCⅡ类分子-SE-TCRVβ三反复合物。MHCⅡ类分子跟SE组成的复合体与TCR结合不周到,SE激活一个T细胞后解离可激活其它的T细胞,这样就使得少量SE可能激活多克隆的T细胞。T细胞被激活后,产生多种细胞因子,如IFN-γ、IL-2、CSF跟TNF-α等,参加某些病理过程的产生跟发展。不同金黄色葡萄球菌菌株产生的SE品种差别较大,同一菌株可产生多种SE。另一方面,不同肠毒素基因序列间类似性较高,部分毒素基因存在密切的连锁关联。为充分意识跟懂得各型肠毒素的致病机理,须要对不同菌株中各型毒素的分布、各毒素基因型间的关联、毒素蛋白的表白跟（文章此处忽略..）性质进行深刻过细的研究。SE引起的食品中毒在细菌性食品中毒中占领很高的比例。SEB的半数致逝世剂量(LD50)约20ng/kg,半数有效剂量(ED50)约0.4ng/kg可能致残。SEB性质牢固,而且易于制备,可能以气溶胶的情势分布。SEB被美国疾病把持核心断定为B类生物战剂。因此,在食品、水源跟人的体液中能检测出低剂量SEB的高灵敏度跟高特异性的方法对食品保险卫生跟反可怕战斗存在非常重要的意思。跟着对SE研究的日益深刻,检测SE的方法也得到始终的发展跟进步,向着高特异性、高灵敏度、简便、疾速的方向发展。传统的方法,如反向被动乳胶凝集法(RPLA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫荧光技巧(immunofluorescencetechnique)等,因为灵敏度较低,其利用受到了很大的限度。Khreich等利用免疫荧光技巧可能在检测缓冲液中检测到的0.02ng/mL的SEB。近年来,树破在抗原抗体彼此作用基本上的生物传感器技巧在检测SEB范畴得到广泛利用。如名义等离子共振生物传感器(Surfaceplasmoesonancebiosensor,SPR)、共振声谱分析(Resonantacousticprofiling,RAP（略..）)、生物半导体技巧(Biologicalsemiconductors,BSCs)、流动打针电容生物传感器(Flow-injectioncapacitivebiosensor)等。生物传感器检测灵敏度高,如流动打针电容生物传感器能检测到最低剂量为0.3pg/ml的SEB,但生物传感器价格昂贵,不合适进行高流畅量检测,目前重要利用于科学研究。化学发光酶联免疫检测法(Chemiluminescentimmunoassay,CLEIA)因其具备灵敏度高、较宽的线机能源学范畴以及简便疾速等特点,现已得到广泛利用,其灵敏度可能跟喷射免疫检测相媲美。CLEIA的基本原理是化学发光的强度跟反应物或产物的浓度呈正比。CLEIA是树破在抗原抗体复合物基本之上,因此存在极高的特异性跟灵敏度。CLEIA中常利用的标记物有辣根过氧化物酶(HRP)跟碱性磷酸酶(ALP)等。抗体跟酶是影响CLEIA灵敏度的两个关键因素。咱们筛选出一对特异性强的抗体配对,利用辣根过氧化物酶标记抗体,利用鲁米诺作为发光底物,树破了存在高度灵敏的微孔板式CLEIA检测SEB的方法。微孔板式CLEIA与电化学发光(electrochemiluminescenc（文章此处忽略..）e,ECL)跟生物传感器比拟,存在操作简便的特点,检测速度快,约2分钟就可能实现一块96空板的检测,能满意须要高通量运行的临床检测的须要。本研究中,咱们利用惯例方法制备了20株针对SEB分子的单克隆抗体,并进行了腹水效价测定跟抗体表位鉴定,从中筛选出两株效价高、特异性强,辨认不同表位组的两株单抗组成抗体配对,并对CLEIA的反应前提进行了优化。本方法的线机能源学范畴在0.01-5ng/mL之间,实际可测的检测限(limitofdetection,LOD)达到0.01ng/mL,批内跟批间变异均小于13%。本方法特异性强,与SEA、SEC1跟SED之间不存在穿插反应,可用于不同基质中SEB的检测,如污水、自来水、河水等环境基质;烤牛肉、花生酱、熏火腿、10%脱脂奶粉、牛奶、橙汁等食品基质;人尿液、血清等体液基质。咱们树破的微孔板式CLEIA检测SEB的方法存在高特异性、高灵敏度,操作简单等长处,在公共卫生跟军事侦查范畴存在广阔的利用前景。

以上为本篇毕业论文范文微孔板式化学发光酶联免疫法检测金黄色葡萄球菌肠毒素B方法的树的介绍部分。

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