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水/离子液体两相体系中全细胞转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草

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毕业论文范文题目:水/离子液体两相体系中全细胞转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草,论文范文关键词:水/离子液体两相体系中全细胞转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草
水/离子液体两相体系中全细胞转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:利用生物法对天然产物进行改性以获得更具价值的化合物已成为生物化工跟医药产业的研究热点。甘草酸改性得到单葡萄糖醛酸甘草次酸(GAMG)在体内更存在良好的溶解度跟跨膜转运才能,且甜度高、热量低、更加保险等特点,使得GAMG存在更加广阔的利用前景。课题组前期分别筛选出一株产紫青霉PenicilliumpurpurogenumLi-3,可能转化甘草酸定向生成GAMG,并克隆了其表白p-葡萄糖醛酸苷酶的基因Pgus,构建了β-葡萄糖醛酸苷酶的原核E.coli跟真核P.pastoris表白体系,获得了三种不同转化类型的菌体。针对生物转化反应中底物甘草酸不易溶于水,甘草酸在水相中转化效力低等问题,本论文尝试在含离子液体体系中利用微生物全细胞为催化剂,转化甘草酸生成GAMG,并与纯水相、非水有机溶剂相体系进行比较,树破了含离子液体反应介质体系的全细胞转化模型,考察离子液体对全细胞转化甘草酸反应前提及抉择性的影响,并对其如(文章此处忽略..)何影响β-葡萄糖醛酸苷酶的催化特点及构造跟功能做初步摸索。研究成果如下:(1)全细胞催化剂跟反应介质的筛选:断定了产紫青霉P.purpurogenumLi-3(w-PGUS)、重组毕赤酵母P.pastoris(r-PGUS-P)跟重组大肠杆菌EscherichiacoliBL21(r-PGUS-E)三种全细胞最佳的播种时光,分辨为引诱产酶72、48跟6h,此时对应的全细胞酶活力分辨为1360、1102跟428U·kg-1。研究了上述三种全细胞在12种非水介质中转化甘草酸生成GAMG的反应,成果表明所选的疏水性离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([Bmim]PF6)的生物相容性最好,全细胞w-PGUS跟r-PGUS-P表示出了较好的催化后果。(2)全细胞w-PGUS在水/[Bmim]PF6两相体系中转化甘草酸生成GAMG的反应:断定了全细胞酶w-PGUS催化生成GAMG的最佳反应前提为,离子液体与水配比为1:1,pH5.2,反应温度30℃,细胞密度60g·L-1。在以上前提下,反应60h产物GA(略..)MG得率为87.63%。为了进步全细胞操作牢固性,经固定化载体的初步筛选,抉择海藻酸钠固定化载体对全细胞w-PGUS进行固定化,考察了固定化w-PGUS细胞在水/[Bmim]PF6两相介质体系中转化甘草酸生成GAMG的反应,并与缓冲液单相体系作为对比。体系地考察了一些因素,如离子液体浓度、缓冲液pH、反应温度、底物浓度等对该反应的影响。断定了在水/[Bmim]PF6两相体系中,最适离子液体参加比例、缓冲液pH、反应温度、底物浓度分辨为10%、5.8、35℃跟6.0mmol·L-1。而在缓冲液单相体系中,缓冲液pH、反应温度、底物浓度分辨为5.0、35℃跟3.6mmol·L-1。离子液体的增加在必定程度上进步了甘草酸转化率跟反应体系pH跟温度牢固性。固定化细胞在水/[Bmim]PF6两相体系中反复利用3次后,甘草酸转化率仍能保持在77.36%,细胞固定化后有助于细胞操作牢固性的进步。(3)重组毕赤酵母r-PGUS-P全细胞在水/[Bmim]PF6两相体系中转化甘草酸生成(此处忽略..)GAMG的反应:断定[Bmim]PF6与水最适配比为2:8(v/v),最适缓冲液pH、反应温度、底物浓度跟细胞参加量分辨为5.4、45℃、6.0mmol·L-1跟8.0g·L-1。在此前提下反应58h,产物GAMG得率跟化学键抉择性(Scb)分辨为69.6%跟67.2%,与纯水相反应体系比拟,分辨进步了12.4%跟12.61%。离子液体轮回利用7次后,回收利用率为93.47%。产物跟副产物在此两相体系中得到有效分别,为后续产物分别纯化带来便利。(4)离子液体对p-葡萄糖醛酸苷酶催化特点及构造跟功能的影响。考察离子液体对p-葡萄糖醛酸苷酶催化反应特点的影响。成果表明,水/[Bmim]PF6两相体系中最适底物4-硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷(pNPG)为10.0mmol·L-1,较缓冲液单相体系进步了1倍,断定了该体系能源学与热力学参数,Vmax为0.153mmol·L-1·min-1,Km为0.620mmol·L-1,表观活化能Ea为35.386KJ·moL-1。而缓冲液单相反应体系中Vmax为0.094mmol·L-1·min-1,Km为0.773mmol(此处忽略..)·L-1,Ea为48.199KJ·moL-1,离子液体[Bmim]PF6降落了反应活化能并进步了反应速率。阐明疏水性离子液体[Bmim]PF6对酶的催化行动有较大的影响。通过荧光光谱跟圆二色谱法分析离子液体对β-葡萄糖醛酸苷酶蛋白的影响,研究表明离子液体处理引诱了酶蛋白分子伸展跟二级构造的改变,a螺旋构造减少β折叠增加。揣测起因为离子液体可能促使酶构型产生改变,疏水性离子液体可使蛋白质四周微环境中水分减少导致酶构象向着刚性构造演变,这是导致酶催化特点改变的关键。


以上为本篇毕业论文范文水/离子液体两相体系中全细胞转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草的介绍部分。
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