Aspergillus niger氨基氧化酶的蛋白质工程学研究

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Aspergillus niger氨基氧化酶的蛋白质工程学研究

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毕业论文范文题目：Aspergillus niger氨基氧化酶的蛋白质工程学研究，论文范文关键词：Aspergillus niger氨基氧化酶的蛋白质工程学研究
Aspergillus niger氨基氧化酶的蛋白质工程学研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：手性胺和氨基酸在医药,农业化学和化工等行业发挥着重要作用。它们经常作为合成子用于制备多种药物活性分子与农药,也可以作为拆分剂用于手性羧酸的拆分。受到天然产物的启发,化学家们通过合成与其类似或相关的化合物来微调与优化其生理作用,在这一过程中,光学纯的手性胺,如α-手性伯胺,是非常有价值的合成子,因此化学以及酶法获得手性胺的方法是如今一个重要的研究方法。总之,需要一种有效的方法,用（文章此处忽略..）于获得给定的结构的光学纯手性胺。酶法合成作为一种对环境无害的化学替代方法,其操作条件温和,通常不需要无水或无氧条件,并可以避免使用高度易燃的有机金属试剂或重金属污染。在有效异源表达系统存在的情况下,酶与其他化学试剂相比一样是容易获得并廉价的。本研究以Aspergillusniger单胺氧化酶晶体结构为基础,使用分子对接技术分析底物与酶的相互作用,在此基础上设计突变位点进行饱和突（本文此处忽略..）变对其底物特异性蛋白质工程改造。根据对(-)-tetrabenazine与MAO-D5分子对接结果的分析,在MAO-D5的W463处引入了终止密码子,构建了W463*突变,其在50mM磷酸缓冲液(pH7.4)与1mM消旋tetrabenazine的反应条件下,于28℃反应24小时后其对(-)-tetrabenazine的转化率为16.7%,具有了催化(-)-tetrabenazine的能力。依据(S)-3-氨基-1苯基丁烷与MAO-D5的分子对接（此处忽略..）结果,依据CASTing方法的突变库构建原则将Leu207与Phe204作为进行饱和突变的位点,经过平板筛选与96孔显色法筛选,得到13个克隆经过测序其中含有6种突变体,对其进行表达纯化后,活力提升最大的突变为F204L/L207V比活力为0.71U/mg,提升最少的为F204W/L207Q突变比活力为0.37U/mg,MAO-D5野生型的比活力为0.15U/mg。使用L207V突变体作为催化剂拆分3-氨基-1苯基丁烷消旋体。在10mM底物浓度,pH7.4的条（略..）件下进过12个小时的反应野生型MAO-D5反应组对映体过量(ee)为29%,L207V反应组对映体过量(ee)为78.44%,经过突变L207V变体相对于野生型基因对(S)-3-氨基-1苯基丁烷的催化能力得到的很大提高。

以上为本篇毕业论文范文Aspergillus niger氨基氧化酶的蛋白质工程学研究的介绍部分。

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