嗜热子囊菌光孢变种超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因的克隆、表达及性质研究

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嗜热子囊菌光孢变种超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因的克隆、表达及性质研究

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毕业论文范文题目：嗜热子囊菌光孢变种超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因的克隆、表达及性质研究，论文范文关键词：嗜热子囊菌光孢变种超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因的克隆、表达及性质研究
嗜热子囊菌光孢变种超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因的克隆、表达及性质研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,简称SOD)(EC.1.15.1.1)系一类金属酶,广泛存在于生物体中。它能够催化超氧阴离子(O2.-)发生歧化反应,从而清除超氧阴离子。在生物体防御氧化损伤的过程中,发挥着重要作用。根据酶分子中所含金属辅基的不同,超氧化物歧化酶主要可分为Cu,Zn-SOD(存在于真核生物中),Mn-SOD(存在于原核生物和真核生物中),Fe-SOD(存在于原核生物和高等植物的叶绿体中)等类型。Mn-SOD和Fe-SOD的氨基酸组成相似,可能起源于同一祖先。嗜热子囊菌光孢变种(Thermoasc（本文此处忽略..）usaurantiacusvar.levisporus)是一种分布广泛、生长上限温度较高的真菌。它能够产生热稳定的具有重要工业价值的超氧化物歧化酶,但是野生菌产酶存在培养温度高等较多不利因素,因而近年来主要研究方向集中于采用基因工程方法构建重组菌,进而表达获得超氧化物歧化酶。本研究中T.aurantiacus在添加干酪素的诱导培养基上产生了超氧化物歧化酶。根据本实验室已克隆的Mn-SOD编码基因设计特异引物,综合运用PCR、RT-PCR技术克隆到编码Mn-SOD基因的cDNA序列,将该基因命名为mn（略..）sod。全长cDNA序列为878bp,包含一个编码231个氨基酸的开放阅读框,前35个氨基酸构成信号肽。序列在Genbank中注册,登录号为EF428323。将基因mnsod与酵母分泌型表达载体pPIC9K双酶切后体外连接,构建酵母重组表达载体pPIC9K/mnsod并测序,保证正确的阅读框。将重组表达质粒pPIC9K/mnsod和pPIC9K空质粒分别用限制性内切酶SacⅠ(位于5’AOX1区内)线性化后,采用电击法转化PichiapastorisGS115酵母感受态细胞,于MD/MM平板上筛选His+Mut+表型的酵母转化子。经过PCR检测及（本文此处忽略..）G418抗性筛选多拷贝整合子,进行甲醇诱导培养。通过检测各转化子每隔24h的蛋白表达情况来筛选高效表达目的超氧化物歧化酶的工程菌株。筛选到表达酶活性最高的菌株MS18,甲醇诱导均为7d酶活性达到最高,酶蛋白表达量为0.92mg/mL。表达的超氧化物歧化酶通过硫酸铵沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子层析等步骤获得了凝胶电泳条带均一的超氧化物歧化酶。SDS-PAGE测得的超氧化物歧化酶单亚基的分子量为21.7kDa。表达超氧化物歧化酶的最适pH值为7.5,最适反应温度为60℃。在pH值为7.5的条件下,该酶在50℃和60℃时保（本文此处忽略..）温1h是基本稳定的,在70℃时保温1h后,仍保留有65%的酶活性;在80℃时,酶的半衰期约为40min。在pH值为6.5~9.0之间表达超氧化物歧化酶保持稳定的酶活性。T.aurantiacus超氧化物歧化酶基因能在重组的毕赤酵母中分泌出具有生物活性的目的蛋白,而且表达产物有较好的热稳定性,这预示了重组Mn-SOD在生物学领域和化工工业的广阔应用前景。

以上为本篇毕业论文范文嗜热子囊菌光孢变种超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因的克隆、表达及性质研究的介绍部分。

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