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原生质体融合技术选育高产乙醇酵母

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毕业论文范文题目：原生质体融合技术选育高产乙醇酵母，论文范文关键词：原生质体融合技术选育高产乙醇酵母
原生质体融合技术选育高产乙醇酵母毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：发酵生产燃料乙醇越来越受到人们的重视。目前,发酵生产乙醇的菌种主要以酵母菌为主。本课题主要的研究内容是对发酵生产乙醇的菌种诱变、筛选、驯化以及原生质体融合,目的是筛选出耐高温、耐乙醇且高效产乙醇的酵母菌株。本文从实验室保藏的30℃米酒酵母M和市售安琪酵母A出发,分别进行紫外(UV)和硫酸二乙酯(DES)复合诱变以及2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)显色筛选。经过UV+DES诱变后,米酒酵母M-UV-DES3(以下简称M-3)在37℃下发酵糖醇转化率为0.475g·g~(-1),提高了10.9%。TTC法活化筛选安琪酵母A的结果表（文章此处忽略..）明活化后的安琪酵母纯度高,产乙醇能力均一,糖醇转化率普遍达到0.41g·g~(-1)以上。其中A-837℃发酵的乙醇产量为72g·l~(-1),糖醇转化率达到0.481g·g~(-1)。考查了葡萄糖浓度对M-3和A-8的影响。当初始葡萄糖浓度达到200g·l~(-1)以上时,酵母受到乙醇和葡萄糖的双重抑制,发酵最大乙醇浓度不再随着葡萄糖浓度升高而升高。故对其进行乙醇浓度梯度驯化培养,以提高其耐乙醇性能。经过多批次的驯化,M-3和A-8的耐乙醇浓度都达到120g·1~(-1)。对驯化后的M-3和A-8进行单倍体分离和筛选,从中选出生物量较高的单倍体SM-4(15.74g（略..）·1~(-1))和乙醇含量较高的单倍体SA-5(127.5g·l~(-1))作为原生质体融合的亲株。对亲株的原生质体制备和再生条件进行了试验,其最佳条件为:采用25ml0.05mol/LEDTA和1m10.5mol/1β-巯基乙醇混合液预处理1h后,用4%的蜗牛酶酶解90min。亲株SM-4的原生质体形成率为89.3%,再生率为22.6%。亲株SA-5的原生质体形成率为91.45%,再生率为17.9%。采用紫外灭活的方法对SM-4的进行彻底灭活,条件为:20W紫外灯下距离20cm垂直照射4min。采用高温热灭活的方法对SA-5进行彻底灭活,条件为:65℃下水浴处理30min。用PEG诱导灭活的双（略..）亲原生质体融合,经TTC平板初筛,发酵复筛以及多批次遗传稳定性实验,获得一株生物量高的高产乙醇融合株F-13,其生物量为26g·1~(-1),乙醇产量为135g·l~(-1),比亲株SA-5和SM-4分别提高了7.3%和17%,耐乙醇能力达到160g·1~(-1)。沿用米酒酵母和安琪酵母原生质体制备融合的方法,以管囊酵母单倍体菌株1770S-5和米酒酵母单倍体菌株SM-4为亲株,对其原生质体分别进行热灭活和紫外灭活后融合。对融合子TTC平板筛选,发酵筛选和5个批次遗传稳定性实验,我们筛选到了一株能发酵100g·l~(-1)混合糖(葡萄糖:木糖=3:1),乙醇产量和总糖（略..）转化率都较高的融合株F-9,其发酵4个批次的乙醇产量为25.55g·l~(-1),总糖转化率为0.25g·g~(-1)。

以上为本篇毕业论文范文原生质体融合技术选育高产乙醇酵母的介绍部分。

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