天然除虫菊有效成分的分离及其免疫学检测方法研究

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天然除虫菊有效成分的分离及其免疫学检测方法研究

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毕业论文范文题目：天然除虫菊有效成分的分离及其免疫学检测方法研究，论文范文关键词：天然除虫菊有效成分的分离及其免疫学检测方法研究
天然除虫菊有效成分的分离及其免疫学检测方法研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：除虫菊(ChrysanthemumCineraraeflium)为菊科多年生草本植物,是目前世界上唯一集约化种植的杀虫植物。除虫菊的杀虫活性物除虫菊酯(pyrethrins)具有高效、低毒、广谱、低残留等优良杀虫特性,对人、温血动物和环境没有危害,已成为当今无公害生物杀虫剂的重要研究热点之一。天然除虫菊酯已广泛应用在农业、林业、生物农药和食品卫生安全等多个领域,因此开发一种简单、快速,适于农药残留现场监控的免疫分析方法具有重要的现实意义。免疫分析法较传统的仪器分析法具有快速、简单、灵敏和选择性高等优点,特别是现场检测的优点,是被列为优先研究、开发和利用的除虫菊酯以及农（此处忽略..）药残留检测技术。目前,国内外还没有相关的研究与应用报道。建立除虫菊酯免疫学检测方法,首先,必须获得除虫菊酯6种单一有效成分的纯品,但除虫菊酯包括除虫菊酯Ⅰ、Ⅱ,瓜叶菊酯Ⅰ、Ⅱ和茉酮菊酯Ⅰ、Ⅱ6种杀虫有效成分,结构相似,分子量相近,使用一般的分离、提纯方法,获得6种有效成分的高纯度产品(纯度达99%)是很困难的。其次,天然除虫菊酯本身不具有诱导产生抗体的能力,必须设法先将除虫菊酯小分子与载体蛋白质偶联才能制备出人工完全抗原,但除虫菊酯分子中不含有可以直接偶联的基团,需通过衍生过程在除虫菊酯分子内产生活性功能基团或者在其分子结构上通过化学方法引入活性功能基团。在此基础上利用除虫菊（本文此处忽略..）酯6种人工完全抗原按一定浓度混合免疫BALB/c小鼠,提取脾脏细胞mRNA并反转录,PCR分别扩增重链及轻链基因库,再通过linker连接,建立除虫菊酯ScFv单链抗体基因库,为筛选除虫菊酯6种单克隆抗体奠定基础。主要研究内容及结果:⑴分离纯化及鉴定天然除虫菊酯6种有效成分,获得6种单一成分的纯品(纯度达99%)。通过优化反相HPLC分离条件,成功分离纯化了天然除虫菊酯六种单一有效成分的纯品,6种成分纯度均达99%。通过GC-MS确证,得到各成分的质谱图,对这些质谱图进行分析,并同谱库中质谱图进行比较,得出每个色谱谱峰对应的结构。第一峰瓜叶菊酯Ⅱ,第二峰除虫菊酯Ⅱ,第三峰茉酮菊酯Ⅱ,第（略..）四峰瓜叶菊酯Ⅰ,第五峰除虫菊酯Ⅰ,第六峰茉酮菊酯Ⅰ。⑵首次通过利用反相HPLC半制备柱成功的制备了除虫菊酯六种单一成分的纯品,纯度均达99%,干燥后的成品,最高损失率为30%,最低损失率为2%。1ml浓度70%的除虫菊酯精油经反相HPLC分离纯化后,可得单一成分固体物达100mg以上。该方法分离效果好、操作简便,适合大量生产除虫菊酯纯品。⑶根据有机化学原理与除虫菊酯分子的特有结构,制备除虫菊酯6种单一成分的人工完全抗原。以天然除虫菊酯6种有效成分为反应原料,与对-肼苯甲酸在弱酸催化加热回流作用下,分别合成含有羧基的六种活性半抗原除虫菊酯。再利用碳化二亚胺法偶联半抗原与牛血清白蛋白,便可得六种人（文章此处忽略..）工完全抗原。分子结合比分别为:除虫菊酯Ⅱ(1:13),除虫菊酯Ⅰ(1:6),瓜叶菊酯Ⅱ(1:11),瓜叶菊酯Ⅰ(1:9),茉酮菊酯Ⅱ(1:9),茉酮菊酯Ⅰ(1:7)。⑷利用免疫学原理与PCR技术,构建抗除虫菊酯ScFv单链抗体基因库。以天然除虫菊酯6种人工完全抗原按一定浓度混合免疫BALB/c小鼠,ELISA检测血清效价,32d效价均达105,提取脾细胞的mRNA,反转录,PCR分别扩增重链及轻链可变区基因,并通过linker连接,得抗除虫菊酯ScFv单链可变区抗体基因库。

以上为本篇毕业论文范文天然除虫菊有效成分的分离及其免疫学检测方法研究的介绍部分。

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