高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究

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高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究

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毕业论文范文题目：高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究，论文范文关键词：高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究
高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:通过长期高脂饮食饲养的方法建立高脂肥胖大鼠模型;正常血糖高胰岛素钳夹实验评价其外周胰岛素抵抗水平;观察长期高脂饮食饲养后大鼠肾脏功能及结构的改变;探讨脂毒性对肾脏微血管病变的影响及吡格列酮干预的作用,为有效预防和治疗本病提供理论依据。方法:选用8周龄健康雄性SD大鼠45只,体重250g左右,适应性饲养1周后,按照随机数字表将大鼠随机分为正常对照组(NC)、高脂饲养组(HF)和高脂饲养+吡格列酮干预组(HP),每组15只:NC组采用普通饲料喂养,脂肪占总热量的10%;HF组采用高脂饲料喂养,脂肪含量占总热量的66%;HP组高脂喂养同时给予吡格列酮15mg·kg-1·d-1剂量灌胃。饲养满32周后将各组大鼠置于代谢笼中收集24小时尿,用于检测24小时尿白蛋白定量;采血检测各项血清学指标;行正常血糖高胰岛素钳夹实验后处死动物,迅速分离两侧肾脏,观察肾脏的颜色、质地,留左肾于4%的中性甲醛溶液,用于HE、PAS染色及血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)免疫组织化学染色,观察肾组织结构的改变和VEGF和ICAM-1的表达情况;右肾置于液氮,备检,用（此处忽略..）于实时荧光定量PCR法检测肾皮质VEGF和ICAM-1mRNA的表达;取腹腔、肾囊及睾丸等处脂肪称重,计为内脏脂肪重量,计算内脏脂肪重量占体重百分比。日本OlympusAU400全自动生化分析仪检测空腹血糖;放射免疫分析方法测定空腹血清胰岛素(fastinginsulin,FINS)、24小时尿白蛋白定量;酶比色法测定甘油三酯(triglyceride,TG);酶法测定血清游离脂肪酸(freefattyacid,FFA)。正常血糖高胰岛素钳夹实验评价其外周胰岛素抵抗水平,行颈静脉、颈动脉插管,体重恢复后,从颈静脉导管以微量泵输入短效胰岛素,速率12mU.min-1.kg-1,同时输注20%葡萄糖溶液。每10min从颈动脉导管取血测定血糖值,根据血糖值调整葡萄糖输注速度,使血糖稳定在5.0±0.2mmol/L,维持120min,计算葡萄糖输注率(GIR)。HE、PAS染色观察肾组织病理结构变化,SP法对肾组织标本进行VEGF和ICAM-1免疫组织化学染色,以DAB法显色,结果以IPP5.1图像分析系统进行半定量分析,比较肾小球平均光密度(肾小球着色面积IOD/肾（文章此处忽略..）小球总面积)。实时荧光定量PCR检测肾皮质VEGF及ICAM-1基因表达,用Trizol试剂一步法提取大鼠肾脏总RNA,ReverTraAce-αcDNA试剂盒合成大鼠肾脏cDNA,采用ABI?PRISM7300实时荧光定量PCR仪进行基因检测。内参照为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)。引物均由上海生工生物公司合成。使用2-??CT方法计算基因表达情况。用SPSS10.0统计分析软件处理实验数据,所得数据符合正态分布的以x±s表示,偏态分布的变量数据以中位数表示,并经对数转换使之正态化后采用t检验及方差分析进行统计分析,若P0.05或P0.01,则认为两组数据差异有统计学意义。结果:1大鼠一般情况和特征:饲养至32周时,HF组和HP组大鼠体重、内脏脂肪重量及内脏脂肪占体重百分比均明显高于NC组(P均0.01)。与NC相比,HF组空腹血糖、胰岛素、甘油三酯、游离脂肪酸、24小时尿白蛋白定量均明显升高(P0.01或P0.05);HP组较HF组则有所改善,并且部分数值已接近NC组水平。2大鼠正常血糖高胰岛素钳夹实验结果比较:从60min开始各组大鼠血糖趋于稳定状态,HF组的（文章此处忽略..）葡萄糖输注率显著降低,稳定状态下平均葡萄糖输注率仅为(4.8±1.2)mg.min-1.kg-1,NC组稳定状态下平均葡萄糖输注率为(11.3±1.7)mg.min-1.kg-1,差别有显著意义(P0.01)。HP组为(10.1±1.5)mg.min-1.kg-1与HF组比较明显改善(P0.01)。3大鼠肾组织形态学改变:NC组大鼠肾小球结构未见明显异常;HF组出现肾小球病理改变,肾小球体积增大,PAS红染区明显扩大,肾小球毛细血管袢略显僵硬,系膜基质增生;HP组肾小球体积、PAS红染区及系膜基质增生均轻于HF组。4肾皮质VEGF及ICAM-1蛋白的表达:NC组大鼠肾小球中VEGF及ICAM-1基本不表达或弱表达,平均光密度分别为(0.0127、0.0145);HF组大鼠VEGF、ICAM-1在肾小球内沿毛细血管壁及系膜区呈线状表达,较NC组明显增高(0.0797、0.0653,P均0.01);HP组肾小球VEGF、ICAM-1平均光密度分别为(0.0301、0.0148),但仍略高于NC组(P均0.05)。5实时荧光定量PCR检测大鼠肾脏基因表达:与NC组相比,HF组VEGFmRNA表达升高21%(P0.01),ICAM-1mRNA表达升43%(P0.01);经吡格列酮干预后,HP组VEGF及I（略..）CAM-1mRNA表达较NC组均下降,分别为30%和15%(P均0.01)。结论:1通过长期高脂饮食诱导可以成功制备高脂肥胖大鼠模型,具有胰岛素抵抗、脂代谢紊乱、糖代谢紊乱等特征。2长期高脂饲养可导致大鼠肾脏微血管病变,引起24小时尿白蛋白定量增加,可能与高游离脂肪酸导致的肾皮质VEGF和ICAM-1的表达增加有关。3吡格列酮干预能明显改善大鼠肾脏微血管病变及尿白蛋白,并下调VEGF和ICAM-1的表达,对高脂所致的肾脏微血管病变起到一定的预防和治疗作用。

以上为本篇毕业论文范文高脂饲养大鼠肾脏微血管病变与脂毒性的关系及其机制研究的介绍部分。

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