雷公藤内酯醇对大鼠胶原诱导性关节炎及成纤维样滑膜细胞MIF表达影响的实验研究

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雷公藤内酯醇对大鼠胶原诱导性关节炎及成纤维样滑膜细胞MIF表达影响的实验研究

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毕业论文范文题目：雷公藤内酯醇对大鼠胶原诱导性关节炎及成纤维样滑膜细胞MIF表达影响的实验研究，论文范文关键词：雷公藤内酯醇对大鼠胶原诱导性关节炎及成纤维样滑膜细胞MIF表达影响的实验研究
雷公藤内酯醇对大鼠胶原诱导性关节炎及成纤维样滑膜细胞MIF表达影响的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:类风湿关节炎(RheumatoidArthritis,RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性自身免疫性疾病,致残率较高。其基本病理改变是滑膜炎和血管翳形成及相关血清组织中多种细胞因子、抗原抗体及黏附分子等变化,其中前炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(Tumornecrotizingfactor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,Il-1β)在RA发病中起着中心环节的作用。而巨噬细胞移动抑制因子(Macrophagemigrationinhibitoryfactor,MIF)作为TNF-α和Il-1β的上游细胞因子,在调控RA发病中可能具有关键作用,近年来倍受国际关注,MIF现已成为RA治疗的新靶点。雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)是传统抗风湿中药雷公藤的提取物,是其免疫抑制和抗炎作用的主要有效成分。本课题拟在建立胶原诱导性关节炎(Collagen-inducedarthritis,CIA)大鼠模型的基础上,从整体、组织到细胞多层次观察雷公藤内酯醇对大鼠CIA及滑膜MIF表达的影响。方法（此处忽略..）:⑴选用45只雄性Wistar大鼠,随机分9组:正常对照组、模型组、雷公藤原药组(TC)、雷公藤多甙(TG)、雷公藤内酯醇组(Tri)、来氟米特组(LEF)、TC+LEF组、TG+LEF组、Tri+LEF组。实验组大鼠予尾根部、右足跖及背部多处皮内注射鸡Ⅱ型胶原共0.2ml,第14d加强免疫制作CIA模型。⑵在造模后第21d,除模型组外,各用药组连续给药14d,在造模及用药前后观察大鼠的一般情况,并记录体重;应用容积测量仪检测大鼠后足体积,并记录关节炎指数(AI)。⑶采用放射免疫法(RIA)测定血清和脾组织匀浆上清液中TNF-α和IL-1β水平。⑷采用ELISA法检测血清MIF水平。⑸采血处死后摘取大鼠双踝关节进行固定、脱钙、石蜡包埋,行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察关节滑膜病理变化并进行评分。⑹对滑膜组织进行MIFPV免疫组织化学染色,并采用计算机图像分析系统对其表达量进行定量分析。⑺应用MTT法检测含药血清对体外培养的大鼠滑膜细胞增殖抑制作用的最佳浓度。⑻采用ELISA法测定滑膜细胞上清液MIF水平。⑼免疫组化染色技术检测MIF基因表达。（此处忽略..）⑽应用SPSS11.5统计软件进行统计分析。结果1CIA大鼠于造模后第10d开始出现关节炎症状,第14d达到高峰,二次加强免疫后症状更明显,造模后第21d模型组及用药组体重明显减少,与正常对照组比较有显著性差异(P0.05);随病程进展,AI和足爪肿胀容积逐渐增加,28d达到高峰,与正常组相比有显著性差异(P0.05);给药14d后用药组两者均下降,与模型组相比有显著性差异(P0.05);Tri+LEF组作用最明显,与模型组相比有显著性差异(P0.05);模型组与正常组相比有显著性差异(P0.05)。2模型组血清和脾组织匀浆上清液中MIF、IL-1β和TNF-α水平明显升高,与正常对照组相比有显著性差异(P0.01),各用药组细胞因子水平与模型组降低,有显著性差异(P0.05),配伍组降低更明显(P0.01)。3CIA大鼠AI、血清IL-1β和TNF-α与MIF水平的相关性分析显示,血清MIF水平与AI、血清IL-1β和TNF-α均呈正相关(r分别为0.498,0.903,0.771,P均0.01)。4病理结果显示,模型组大鼠踝关节滑膜组织有大量炎性细胞浸润,关节面不完整,有血管翳形成;用药组滑膜组织炎性细胞浸润明显减轻,软骨破坏程度降低;与正常对（略..）照组比较,模型组大鼠踝关节病变积分显著增高(P0.01);各用药组病变积分均明显下降,与模型组相比有显著性差异(P0.05);Tri+LEF组病变积分最低,与模型组相比具有显著性差异(P0.05)。5免疫组化定量分析,CIA模型组大鼠滑膜组织MIF表达阳性密度显著高于正常对照组(P0.01);与模型组比较,用药组MIF表达阳性密度均降低(P0.01);配伍组表达阳性密度与单一用药组相比,有显著性差异(P0.05)。6MTT法检测结果显示,含药血清对体外培养的大鼠滑膜细胞增殖有显著的抑制效应,与空白对照组相比有显著性差异(P0.05),其作用的最佳药物浓度为中药单体20%浓度或配伍组中药单体10%浓度联合LEF30%浓度;配伍组较单一用药组作用更明显(P0.05)。7ELISA法检测滑膜细胞上清液显示,各用药组MIF表达均降低,与空白对照组相比有显著性差异(P0.01);配伍组MIF表达与单一用药组比较有显著性差异(P0.05)。8免疫组化法检测滑膜细胞MIF基因表达结果为:空白对照组标记指数(LI)45.30±4.42,Tri组33.45±2.27,Tri+LEF组20.30±2.25,与空白对照组比较均有显著性差异(P0.05)。说明Tri可减轻滑膜组织MIF基因表达。结论（文章此处忽略..）1MIF在CIA大鼠血清、滑膜组织表达明显增强,且血清MIF水平与AI及血清TNF-α和IL-1β呈正相关关系,提示MIF作为上游细胞因子在关节炎发病中起重要作用。2雷公藤内酯醇对大鼠CIA具有显著治疗作用,其作用机制可能与降低MIF及TNF-α和IL-1β表达,抑制成纤维滑膜细胞增殖等有关。3雷公藤内酯醇与来氟米特配伍在治疗大鼠CIA、抑制体外培养滑膜细胞增殖及滑膜细胞表达MIF等方面显示出明显的协同/增效作用,为中药有效成分与化学药物在RA治疗中的联合应用提供了实验依据。

以上为本篇毕业论文范文雷公藤内酯醇对大鼠胶原诱导性关节炎及成纤维样滑膜细胞MIF表达影响的实验研究的介绍部分。

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