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桃褐腐菌角质酶的克隆与表达

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毕业论文范文题目：桃褐腐菌角质酶的克隆与表达，论文范文关键词：桃褐腐菌角质酶的克隆与表达
桃褐腐菌角质酶的克隆与表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：角质酶是一种具有水解酯键能力的酶，属于α/β水解酶家族中的一种。可以催化水解各种长短链的甘油三酯等酯类。由于反应条件温和、催化效率高等特点，近些年来在纺织、食品等行业中应用非常广泛。桃褐腐菌(Moniliniafructicola)是一种可致桃树果实腐烂的真菌，对果实生产造成严重经济损失。其侵染桃果实的主要过程就是诱导自身表达角质酶，分解桃果实表皮中的角质类物质。现阶段对于基因工程生产角质酶的研究集中在腐皮镰胞菌(Fusar（略..）iumsolani)角质酶基因和嗜热子囊菌(Thermobifidafusca)等菌种中，通过获取这两类菌体中的角质酶基因进行基因工程菌的构建。然而文献中对于桃褐腐菌角质酶基因的应用并不深入。原核基因工程表达系统具有发酵时间短、高效、构建过程简单等优点。本实验采用大肠杆菌(E.coli)BL21及肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)两种表达系统，分别使用pET-28a质粒及pET-PK质粒。在大肠杆菌的甘油代谢途径中，（文章此处忽略..）pET-28a可由IPTG诱导T7启动子大量胞内表达重组载体中的基因片段。在肺炎克雷伯菌的甘油代谢途径中，由于克雷伯菌自身的组成型启动子是PK启动子，在甘油存在的条件下即可表达。pET-PK质粒由pET-28a质粒改造而得，将原有的T7启动子换成PK启动子后，下游连接重组片段参与工程菌的组成型胞内表达。本实验通过获取桃褐腐菌角质酶基因cutl,分别连接至pET-28a与pET-PK质粒中。重组大肠杆菌pET-28A-cutl/BL21由化学法（此处忽略..）转化而得,重组克雷伯菌pET-PK-cutlk.p由电转化方法而得。通过对两株重组菌表达条件分析、表达生物量测定、表达单位蛋白量测定、表达单位酶活量测定等步骤,可确定重组大肠杆菌在诱导表达18小时后产生角质酶的酶活可达每100μL4U,重组克雷伯菌在表达21小时后酶活可达每100μL5U,然而重组克雷伯菌的单位蛋白量并没有显著提高,说明表达量尚有可上升的空间。此外,本实验成功构建了重组毕赤酵母pPICZaA-cutl/GS115重组菌株后,经过测定（此处忽略..）甲醇诱导表达最佳添加条件、重组菌生长量与甲醇添加关系、以及单位产蛋白量、单位产酶量、角质酶最适温度及最适pH等方面数据后,可知此工程菌产酶活高达每100μL12.856U左右,在经过镍柱纯化等步骤后酶活值会更高。在重组菌对桃果实侵染实验后发现,桃褐腐菌角质酶具有较强的侵染力,因此说明重组角质酶工程菌在工业上具有更广阔的应用前景。

以上为本篇毕业论文范文桃褐腐菌角质酶的克隆与表达的介绍部分。

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