HCV IRES翻译启动活性的细胞特异性及其机制研究

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HCV IRES翻译启动活性的细胞特异性及其机制研究

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毕业论文范文题目：HCV IRES翻译启动活性的细胞特异性及其机制研究，论文范文关键词：HCV IRES翻译启动活性的细胞特异性及其机制研究
HCV IRES翻译启动活性的细胞特异性及其机制研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：HCV5'端非编码区含内部核糖体进入位点(IRES),其功能主要是调控病毒基因复制和以非帽依赖方式启动翻译病毒蛋白,而且HCV5'UTR在不同基因型和株中呈现高度的序列保守,这也使它成为了抗病毒药物研发的良好靶位。本实验旨在研究在不同宿主细胞的翻译体系下,缺失不同结构域的HCV5'UTR翻译启动活性的差异,并探索其机制。方法：(1)以脂质体介导基因转染技术,将HCV5'UTR缺失不同（本文此处忽略..）结构域并调控Flue的真核表达质粒与调控Rluc的真核表达质粒pRL-TK共转染至不同的细胞中,转染后36h。①提取细胞RNA进行半定量RT-PCR检测,利用质粒pRL-TK校正其它质粒的转染效率；②用双荧光素酶报告基因检测系统检测Fluc基因相对表达活性,分析HCV5'UTR缺失不同结构域后在不同翻译体系中翻译启动活性的差异。(2)选择同种细胞中活性差异较大的缺失HCV5'UTR不同（文章此处忽略..）结构域的质粒进行体外转录,获得RNA,使之与细胞蛋白质进行特异性结合,以筛选出特异性的结合蛋白。结果：(1)缺失HCV5'UTR的DomainⅠ及下游的单链序列后,HCVIRES的活性分别与缺失前相比：在Hela细胞和C6细胞中无明显影响,在L-02细胞中活性下降为46%,而在293T细胞则为缺失前的146%。(2)缺失HCV5'UTR的DomainⅡ后,HCVIRES的活性分别与缺失前相比：在Hela细胞中,缺（略..）失后活性仅为缺失前的49%,而在L-02细胞、C6细胞和293T细胞中,活性分别为缺失前的140%、160%和235%。(3)体外转录出了缺失HCV5'UTR不同结构域的RNA,并分离出了能与其特异性结合的蛋白质。结论：(1)HCV5'UTR的DomainⅠ对HCVIRES在L-02细胞株中的翻译启动活性具促进作用,而在293T细胞株中有抑制作用,在C6细胞株和Hela细胞株中DomainⅠ对IRES翻译启动活性无明显作用。(2)HCV5'UTR的（此处忽略..）DomainⅡ对HCVIRES在Hela细胞株中的翻译启动活性有促进作用,而对其他三种细胞株却有抑制作用。(3)利用链霉亲和素磁珠将体外转录出来的RNA与细胞蛋白结合,发现了特异性结合的蛋白质,但尚未发现差异蛋白。

以上为本篇毕业论文范文HCV IRES翻译启动活性的细胞特异性及其机制研究的介绍部分。

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