中药地黄对BALB/c小鼠免疫功能影响的实验研究

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中药地黄对BALB/c小鼠免疫功能影响的实验研究

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毕业论文范文题目：中药地黄对BALB/c小鼠免疫功能影响的实验研究，论文范文关键词：中药地黄对BALB/c小鼠免疫功能影响的实验研究
中药地黄对BALB/c小鼠免疫功能影响的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：研究地黄水提物对BALB/c小鼠的免疫学调节活性。体外实验观察三个产地、两个煎次、五个浓度的生地与熟地水提物对BALB/c小鼠脾细胞的增殖作用，以筛选出活性最强的一种；通过溶血空斑实验证实地黄对IgM抗体形成细胞的刺激作用；用生物法研究地黄增强小鼠单核细胞产生细胞因子TNF-α的作用；体内实验观察地黄对小鼠B淋巴细胞IgG的产生和对淋巴细胞功能的影响，利用分子筛层析技术分析地黄化学的成分。方法：1.地黄水提物制备分别称取三个产地的生地和熟地各100g浸泡于1000ml蒸馏水中，过夜后用微火煮沸60分钟，滤出第一煎药液（10%），药渣同法滤出第二煎药液（10%）。用滤器抽滤后按5%，2.5%，1.25%，0.625%倍比稀释后放冰箱备用。2.淋巴细胞增殖实验将BALB/c小鼠脾细胞制成1x106个/毫升细胞悬液，分别与终浓度为5μg/ml的ConA,5μg/ml的LPS和五个浓度的十二种中药煎剂，在含有10%FCS的RPMI1640培养基中于96孔培养板上，在5%CO2、饱和湿度，37℃条件下培养3天，用MTT法读492nm的吸光度值，计算增殖率，选出（文章此处忽略..）增殖活性最强的样本。所有实验均重复三次。3.溶血空斑实验测定B细胞IgG产生：用无脂载玻片制作玻片小室备用。取无菌脱纤维绵羊红细胞，用无菌生理盐水离心洗涤3次，制成15%SRBC悬液。采集3只以上豚鼠血混合后分离血清，应用时以Hank's液稀释成1：3浓度。免疫脾细胞悬液的制备将16只BALB/c小鼠随机分为两组，实验组8只小鼠灌胃给药5000mg/kg，每日一次，对照组小鼠8只依同法喂等量自来水，连续8天。实验前4天，以5%新鲜SRBC生理盐水悬液0.4mlip免疫16只小鼠，第8天将小鼠处死取脾制成悬液备用。将15%的SRBC悬液50μl，1：3稀释的补体50μl，1x106个/毫升小鼠脾细胞悬液20μl和Hank's液180μl混匀后灌注于小室内，37℃1.5小时后取出对着光亮处计数溶血空斑数，并计算出每106个脾WP=4细胞中的空斑数。4.单核细胞活性测定取小鼠脾细胞悬液，置于塑料培养皿中37℃孵育2小时，收获贴壁细胞，调整细胞浓度为1x106个/毫升，加入96孔板，分别加入被测样品2.5μl,5μl,10μl,20μl，阳性对照加入LPS,阴性对照加入PBS各10μl，37℃培养（此处忽略..）24小时后收获上清液备用。收集培养中的细胞株L929调整细胞浓度为2x105/ml，加入96孔板中，37℃孵育24小时，弃上清，每孔加放线菌素D(2μg/ml)50μl和备用的培养上清液50μl，37℃孵育24小时，用MTT法测492nm吸光度值，同时做TNF-α标准品活性测定，绘制标准曲线，从标准曲线上查取样本的TNF-α含量。5.体内实验随机将16只BALB/c小鼠分为给药组和对照组各8只，分别按每日一次，每只0.4ml剂量灌胃中药和自来水，连续9天后处死小鼠，取血和脾脏，称脾重并制成脾细胞悬液在96孔培养板上用MTT法测定淋巴细胞增殖反应，用单扩散法测小鼠血清IgG含量。6.化学成分分析将1ml中药水提液加样于SephadexG-100层析柱（2.0x15cm）内，用PBS平衡流速至10ml/h，每管收集2ml层析液。各管中的蛋白质含量用紫外分光光度计测定280nm吸光度值；糖含量用酚-硫酸法测定，结果用492nm吸光度值表示。结果：1.地黄水提物对小鼠脾细胞增殖的影响如表1所示,用不同标本作用于小鼠脾细胞后，其增殖结果如下：生地与熟地相比较，熟地对小鼠脾（略..）细胞的增殖效果好，两者之间有十分显著的差异（P0.0005）；三个产地的地黄相比也有十分显著的差异（P0.0005），河南的优于山西的，山西的优于安国的；五个浓度相比，同样有十分显著的差异（P0.0005），有较好的量效关系，其中10%浓度的效果最好，两个煎次相比较，有十分显著的差异（P0.0005），第一煎剂效果比第二煎剂好。所以筛选出最佳搭配为10%的河南产熟地第一煎剂，以下实验所用中药均为10%河南熟地第一煎剂。并且药物种类、产地、浓度、煎次四个因素之间有交互作用。2.河南熟地对B细胞抗体产生的影响溶血空斑实验显示：熟地组产生的溶血空斑数与空白组相比较有十分显著的差异（P0.01）,说明河南熟地对IgM抗体形成细胞有刺激作用，具有增强体液免疫功能的作用。3.单核细胞TNF-α活性测定结果说明河南熟地显著刺激小鼠单核细胞产生细胞因子TNF-αWP=5（P0.05）。4.体内实验熟地组小鼠的平均脾重为0.1g，而空白组平均脾重为0.05g，两者之间有明显差异。两组小鼠血清IgG单扩散沉淀环直径相比较，有显著性差异（P0.05），喂药组小鼠（此处忽略..）脾细胞增殖与空白组相比较有十分显著性差异（P0.01）。5.化学成分分析经分子筛层析，分离出河南熟地水提剂中含有一种分子量大但含量少的蛋白质成分和一种分子量小而含量多的糖蛋白成分。结论：三个产地的生地、熟地对小鼠都有免疫调节作用，其中河南熟地效果最好，并通过对单核细胞和B细胞的刺激作用来调节，能增强特异性体液免疫功能，并对淋巴细胞增殖有刺激作用。这些活性可应用于临床调节免疫功能和治疗疾病。

以上为本篇毕业论文范文中药地黄对BALB/c小鼠免疫功能影响的实验研究的介绍部分。

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