衣原体RNase H Ⅱ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定

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衣原体RNase H Ⅱ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定

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毕业论文范文题目：衣原体RNase H Ⅱ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定，论文范文关键词：衣原体RNase H Ⅱ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定
衣原体RNase H Ⅱ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：衣原体(Chlamydia)是一种可导致多种疾病的病原微生物,它属严格胞内寄生,没有基因水平的遗传操作系统。于其它生物体如大肠杆菌中表达衣原体蛋白质,并在体外鉴定表达蛋白质的生物学功能是目前衣原体分子生物学研究的可行方法。RNaseH是一类特异性内切RNA/DNA杂合体中RNA链的酶,其活性依赖于二价金属离子,酶切产物具有5′-磷酸末端和3′-羟基末端。RNas（略..）eH普遍存在于病毒、原核生物、真核生物。单个的细菌和真核细胞通常含有两个不同的RNaseH,它们彼此之间表现出较少的序列相似性。依据氨基酸序列特征已经将RNaseH分为两个家族,1型RNaseH和2型RNaseH。衣原体(Chlamydiapneumoniae)AR39全基因组序列分析表明衣原体AR39没有编码RNaseHI的基因,但有两个序列不同的编码RNaseHII（文章此处忽略..）的基因:CP0645和CP0782。我们分别将CP0645和CP0782编码的酶命名为CpRNaseHIIa和CpRNaseHIIb。以衣原体全基因组为模板,PCR获得衣原体AR39的CP0645和CP0782基因。采用常规的基因重组技术,即限制性内切酶酶切和T4-DNA连接酶连接,将这两个基因克隆到大肠杆菌表达质粒pET28a中。DNA序列分析证实重组质粒含有相应的衣原体基因,其读码框架正确。参照Novage（文章此处忽略..）n公司提供的操作手册,表达并纯化了重组的CpRNaseHIIa和CpRNaseHIIb。在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内,表达的CpRNaseHIIa中可溶形式占20%,而表达的CpRNaseHIIb可溶形式占65%。变性和非变性的镍-树脂(Ni-NTA)亲和层析纯化技术分别用于这两种重组蛋白质的纯化。非变性的镍-树脂(Ni-NTA)亲和层析纯化能够获得有活性的蛋白质,而变性的镍-（此处忽略..）树脂(Ni-NTA)亲和层析纯化获得的蛋白质没有活性,需要进一步复性才具有活性。简单的透析复性,通过透析溶液的尿素浓度梯度逐步递减,使变性的CpRNaseHIIa和CpRNaseHIIb复性,所获得的酶比活性与用非变性纯化获得的蛋白质相当。

以上为本篇毕业论文范文衣原体RNase H Ⅱ编码基因的克隆与表达及酶的纯化与性质鉴定的介绍部分。

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