shRNA沉默survivin基因抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长的实验研究

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shRNA沉默survivin基因抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长的实验研究

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毕业论文范文题目：shRNA沉默survivin基因抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长的实验研究，论文范文关键词：shRNA沉默survivin基因抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长的实验研究
shRNA沉默survivin基因抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长的实验研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的:构建survivinshRNA干扰质粒载体,用于转染人鼻咽癌细胞株CNE2,体内、体外观察suvivinshRNA表达载体对CNE2细胞survivin基因/蛋白表达、细胞凋亡、细胞增殖和放射敏感性的影响,从而为临床鼻咽癌的基因治疗奠定实验基础。方法:①根据survivin的cDNA序列设计构建survivinshRNA重组质粒pGenesil-1-survivin及阴性对照重组质粒pGenesil-1-HK,经酶切和测序鉴定正确后,分别提取两重组质粒转染CNE2细胞;②实验分为空白对照CNE2细胞组(简称CNE)、阴性对照重组质粒pGenesil-1-HK组(简称HK)和survivinshRNA重组质粒pGenesil-1-survivin组(简称SURVIVIN),分别进行体内、外实验（本文此处忽略..）;③瞬时转染48h时,FCM检测细胞凋亡,RT-PCR测定survivinmRNA表达,以观察survivinshRNA表达载体瞬时转染CNE248h后对survivin基因表达的抑制作用;④G418筛选获得各重组质粒的稳定转染CNE2细胞,RT-PCR测定survivinmRNA表达,FCM和Western-blotting检测蛋白表达,MTT测定细胞增殖能力;克隆形成实验观察细胞放射敏感性;⑤将各组稳定转染CNE2细胞接种BALB/cnu/nu裸鼠,建立荷瘤裸鼠模型;通过观测成瘤时间、瘤体积和瘤重量,免疫组化测定survivin蛋白表达等方法,研究survivinshRNA对人鼻咽癌CNE2细胞生长的抑制作用。结果:①酶切和测序鉴定结果表明,成功构建survivinshRNA重质粒表达载（文章此处忽略..）体pGenesil-1-survivin和阴性对照质粒pGenesil-1-HK;②瞬时转染48h时,凋亡指数结果为:空白对照组(3.57±0.34)%;pGenesil-1-HK组(3.77±0.33)%;pGenesil-1-survivin组(6.33±0.37)%;pGenesil-1-survivin组的凋亡指数是空白对照组的1.78倍(P0.05);pGenesil-1-survivin组survivinmRNA表达的抑制率为63.53%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05),而阴性对照pGenesil-1-HK组与空白对照组间无明显差异(P0.05);③G418成功筛选出各重组质粒稳定转染的CNE2细胞,FCM测得各组稳定转染细胞百分率均达85%以上;稳定转染pGenesil-1-survivin组CNE2细胞survivinmRNA表达抑制率为64.55%,与空白对照组及阴性对照pGen（此处忽略..）esil-1-HK组比较,差异均有统计学意义(P0.05);FCM及Western-blotting检测survivin蛋白表达抑制率分别为50.29%和51.24%,两结果基本符合,且与空白对照组及阴性对照pGenesil-1-HK组比较,差异均有统计学意义(P0.05);④细胞增殖速度的比较表明,pGenesil-1-survivin组稳定转染细胞的增殖能力明显抑制;⑤克隆形成实验证实survivinshRNA表达载体pGenesil-1-survivin沉默survivin基因表达后,可提高人鼻咽癌CNE2细胞的放射敏感性;⑥pGenesil-1-survivin组移植瘤较空白对照组及阴性质粒pGenesil-1-HK组的平均成瘤时间延迟,平均瘤体积、重量明显下降(P0.05),切片的免疫组化结果进一步证实pGenesil-1-（文章此处忽略..）survivin组survivin蛋白表达明显下调。结论:成功构建survivinshRNA重组质粒pGenesil-1-survivin;pGenesil-1-survivin重组质粒能在体内、外干扰人鼻咽癌CNE2细胞survivin基因表达,抑制CNE2细胞增殖,提高CNE2细胞放射敏感性;5’-GGACCACCGCATCTCTACA-3’可作为人鼻咽癌CNE2细胞survivin基因的RNA干扰靶点。

以上为本篇毕业论文范文shRNA沉默survivin基因抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长的实验研究的介绍部分。

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