基于逆转录病毒载体的高效表达系统的建立和应用

搜索高级搜索

原创毕业论文

基于逆转录病毒载体的高效表达系统的建立和应用

作者: 浏览:5次

免费专业论文
政治工作论文
计算机论文
营销专业论文
工程管理论文范文
医药医学论文范文
法律论文范文
生物专业论文
物理教学论文范文
人力资源论文范文
化学教学论文范文
电子专业论文范文
历史专业论文
电气工程论文
社会学专业论文
英语专业论文
行政管理论文范文
语文专业论文
电子商务论文范文
焊工钳工技师论文
社科文学论文
教育论文范文
数学论文范文
物流论文范文
建筑专业论文
食品专业论文
财务管理论文范文
工商管理论文范文
会计专业论文范文
专业论文格式
化工材料专业论文
英语教学专业论文
电子通信论文范文
旅游管理论文范文
环境科学专业论文
经济论文
人力资源论文范文
营销专业论文范文
财务管理论文范文
物流论文范文
财务会计论文范文
数学教育论文范文
数学与应用数学论文
电子商务论文范文
法律专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文
计算机专业论文
教育管理论文范文
现代教育技术论文
小学教育论文范文
机械模具专业论文
报告,总结,申请书
心理学论文范文
学前教育论文范文

收费计算机专业论文范文

收费计算机专业论文
Delphi
ASP
VB
JSP
ASP.NET
VB.NET
java
VC
pb
VS
dreamweaver
c#.net
vf
VC++
计算机论文

毕业论文范文题目：基于逆转录病毒载体的高效表达系统的建立和应用，论文范文关键词：基于逆转录病毒载体的高效表达系统的建立和应用
基于逆转录病毒载体的高效表达系统的建立和应用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：逆转录病毒表达系统是近年来新兴起的一种高效表达系统,它由逆转录病毒载体,包膜蛋白载体和包装细胞系构成。由于逆转录病毒和宿主细胞基因组的重组倾向于发生在转录活性区,口炎疱疹病毒G蛋白能有效扩大逆转录病毒感染宿主细胞的范围、提高逆转录病毒的感染效率。与质粒转染等其他传统的外源基因介导方法相比,逆转录病毒表达系统可以大大提高获得高效表达外源基因细胞系的几率。本课题的主要研究目标是建立和评价以逆转录病毒载体介导的外源基因高效表达系统,利用基于逆转录病毒载体的外源基因表达技术构建高效表达rhPC的HEK293细胞系。同时,拟从表达调控元件着手,优化逆转录病毒载体、提高逆转录病毒表达系统的效率。将绿色荧光报告基因EGFP构建到逆转录病毒载体PQCXIN中,用逆转录病毒载体PQCXIN/EGFP和包膜蛋白质粒pVSV-G共转染包装细胞GP（略..）2-293,获得感染滴度达到1.61×107GTU/ml的PQCXIN/EGFP重组病毒。分别用PQCXIN/EGFP病毒感染和pcDNA3.1/EGFP质粒转染HEK293细胞和CHO-K1细胞,采用流式细胞仪分析EGFP阳性细胞的相对荧光强度,PQCXIN/EGFP病毒感染获得的EGFP阳性细胞的相对荧光强度约为pcDNA3.1/EGFP质粒转染的EGFP阳性细胞的相对荧光强度的2倍。逆转录病毒的感染滴度和感染效率是影响逆转录病毒载体介导外源基因表达效率的重要因素。采用分步转染法,即先用逆转录病毒载体PQCXIN/EGFP转染GP2-293细胞,再用pVSV-G转染EGFP表达效率较高的GP2-293细胞,能在一定程度上提高PQCXIN/EGFP病毒的感染滴度。浓度为4～8μg/ml的聚凝胺有利于提高细胞对PQCXIN/EGFP病毒的敏感性、提高感染效率。以EGFP的荧光（本文此处忽略..）强度为评价指标,考察PQCXIN/EGFP病毒多轮感染HEK293细胞对EGFP表达效率的影响。经过4轮PQCXIN/EGFP病毒感染的HEK293细胞的EGFP表达水平比只经1轮PQCXIN/EGFP病毒感染的HEK293细胞提高了3.5倍左右。同时,经4轮病毒感染获得的混合克隆在多次传代后的EGFP表达水平只降低了22%;经pcDNA3.1/EGFP质粒转染的HEK293细胞混合克隆在多次传代后的EGFP表达水平下降了69%。结果表明,PQCXIN/EGFP病毒的反复多轮感染能有效地提高感染细胞的EGFP表达水平和稳定性。将rhPC基因替换EGFP基因,进一步比较PQCXIN/rhPC病毒感染和pcDNA3.1/rhPC质粒转染HEK293细胞的外源基因表达效果。重组病毒PQCXIN/rhPC感染得到的HEK293细胞的rhPC表达水平为326.4ng/106cells/day,pcDNA3.1/（此处忽略..）rhPC质粒转染HEK293细胞的rhPC表达水平仅为8.6ng/106cells/day。用EGFP基因代替病毒载体PQCXIN/rhPC中的neo基因,通过IRES与rhPC基因连接,构建PQCXIN/rhPC/EGFP载体,使EGFP和rhPC的表达水平形成关联。借助流式细胞仪分选EGFP表达水平较高的细胞,经克隆化和ELISA检测筛选高效表达rhPC的HEK293细胞,获得了rhPC表达水平为10.7μg/106cells/day的HEK293细胞系。为了进一步提高逆转录病毒表达系统的效率,以EGFP为报告基因,采用质粒载体pcDNA3.1考察包括启动子、增强子、位置效应元件和RNA稳定元件等在内的表达调控元件对EGFP表达效率的影响。转染含RNA稳定与输出元件RESE的质粒载体pcDNA3.1(pcDNA3.1/EGFP/RESE)的HEK293细胞的EGFP的表达水平（略..）提高了1.58倍。进一步通过tPA、Pro-uk和rhPC验证RESE的作用,RESE均不同程度地提高了tPA、Pro-uk和rhPC的表达效率。其中,rhPC的表达水平提高了近5倍,并经过单克隆化得到了表达水平为16.9μg/106cells/day的HEK293细胞系。将RESE构建到病毒载体中,RESE对逆转录病毒载体介导的外源基因表达效率的影响的考察仍在进行中。以上研究结果不仅表明逆转录病毒介导的外源基因表达系统是一种极具发展和应用潜力的外源基因高效表达系统。同时也为rhPC的开发研究打下了一定的基础。

以上为本篇毕业论文范文基于逆转录病毒载体的高效表达系统的建立和应用的介绍部分。

本论文在计算机论文栏目，由论文网(www.zjwd.net)整理,更多论文,请点论文范文查找

相关论文

收费专业论文
汉语言文学论文
物理学论文
自动化专业论文
测控技术专业论文
历史学专业论文
机械模具专业论文
金融专业论文
电子通信专业论文
材料科学专业论文
英语专业论文
会计专业论文
行政管理专业论文
财务管理专业论文
电子商务国贸专业
法律专业论文
教育技术学专业论文
物流专业论文
人力资源专业论文
生物工程专业论文
市场营销专业论文
土木工程专业论文
化学工程专业论文
文化产业管理论文
工商管理专业论文
护理专业论文
数学教育专业论文
数学与应用数学专业
心理学专业论文
信息管理专业论文
工程管理专业论文
工业工程专业论文
制药工程专业论文
电子机电信息论文
现代教育技术专业
新闻专业论文
艺术设计专业论文
采矿专业论文
环境工程专业论文
西班牙语专业论文
热能与动力设计论文
工程力学专业论文
酒店管理专业论文
安全管理专业论文
交通工程专业论文
体育教育专业论文
教育管理专业论文
日语专业论文
德语专业论文
理工科专业论文
轻化工程专业论文
社会工作专业论文
乡镇企业管理
给水排水专业
服装设计专业论文
电视制片管理专业
旅游管理专业论文
物业管理专业论文
信息管理专业论文
包装工程专业论文
印刷工程专业论文
动画专业论文
环境艺术专业论文
信息计算科学专业
物流专业论文范文
人力资源论文范文
营销专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文范文
法律专业论文范文
教育管理论文范文
小学教育论文范文
学前教育论文范文
财务会计论文范文

电子商务论文范文

上一篇：产磷脂酶C菌株的筛选及其酶学性质..

下一篇：用噬菌体随机肽库筛选hCD81模拟小..