针对MTA1 mRNA的siRNA载体构建及其对基因沉默作用

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针对MTA1 mRNA的siRNA载体构建及其对基因沉默作用

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毕业论文范文题目：针对MTA1 mRNA的siRNA载体构建及其对基因沉默作用，论文范文关键词：针对MTA1 mRNA的siRNA载体构建及其对基因沉默作用
针对MTA1 mRNA的siRNA载体构建及其对基因沉默作用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：背景跟目标恶性肿瘤是临床上深感棘手的困难，其致逝世的重要起因是肿瘤细胞产生浸润、转移。肿瘤的转移是一个波及多种基因及其产物的复杂过程，包含肿瘤细胞从原发灶脱离，侵入血管、淋巴管，黏附内皮细胞而停留在远隔部位，向外浸润，引诱新生血管构成，回避宿主抗肿瘤反应跟在转移部位成长等过程。因此懂得肿瘤浸润、转移所波及的基因跟基因产物是目前国内外一项重要的研究课题。近年来已有很多对于肿瘤转移相干基因的表白与肿瘤转移关联的研究，以期寻找出保险有效的医治恶性肿瘤的打算，延长恶性肿瘤患者的生存期，改良其生活品质。肿瘤转移相干基因(metastasisassociatedgene1，MTA1)定位于染色体14q32.3，人MTA1基因编码分子量为82KD，含715个氨基酸残基的蛋白质MTA1。MTA1蛋白存在明显的亲水性，不属于细胞名义蛋白或分泌蛋白。蛋白羧基末端富含脯氨酸，与SH3结合域完全配对。而SH3在信号转导通路中参加蛋白跟蛋白间彼此作用，构成细胞骨架组分，并与信号转导通路中与浸润跟转移相干的基因有关。MTA1蛋白还（略..）存在9个蛋白激C(PKCs)、2个酪氨酸激酶(TKs)、7个酪蛋白激酶Ⅱ(CKⅡ)的磷酸化位点以及4个N_2糖基化位点。阐明MTA1蛋白可能在信号转导通路中与其余一些保持细胞畸形功能的蛋白产生作用。应用Southernblotting分析发明，MTA1基因在进化当中高度保守。MTA1被认为是细胞核小体重构跟脱乙酰基复合物(nucleosomeremodelingandhistoneeacetylase，NuRD)的组成部分之一，NuRD存在核小体重构与组蛋白脱乙酰酶活性。组蛋白乙酰化能抉择性的使某些染色质区域的构造由周到变得疏松，开放某些基因的转录，加强其表白程度，ATP依附的NuRD的乙酰化与脱乙酰化代表了胞核构造与功能调剂的个别机制。它们通过影响染色质的状况来调剂转录复制过程，调控组蛋白脱乙酰基从而发挥其生物学作用。目前多数研究认为MTA1的高表白与一些上皮源性肿瘤的侵袭转移密切相干。MTA1可能是通过参加信号传导与基因表白调控一系列有关浸润转移的蛋白而起重要作用。MTA1基因的作用将为恶性肿瘤侵（文章此处忽略..）袭转移的调控提供一个有效的作用靶点跟把持手段。近多少年来崛起的RNA烦扰技巧，为肿瘤的分子生物医治开辟了新的道路。与传统基因沉默技巧比拟，存在后果强、持续时光长等上风，目前这一技巧已在肿瘤的基因医治方面显示出诱人的前景。本实验拟构建针对MTA1mRNA的siRNA重组载体，将siRNA对应的DNA发卡样双链序列克隆入载体内，位于H1启动子下游，转染入肿瘤细胞内，在细胞内表白MTA1靶向的siRNA分子，特异性沉默MTA1的表白。方法根据GenBank中MTA1基因(NM_004689)的序列，利用以下多少个网址提供的设计分析软件进行设计http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_design.html；http://www2.takara-bio.co.jp/sirna-d/top.php。对上述候选序列通过美国生物技巧信息核心(NationalCenterforBiotechnologyInformation)的在线同源序列检索http://www.ncb（文章此处忽略..）i.nlm.nih.gov/Blast，断定针对MTA1的siRNA序列。合成MTA1发卡样siRNA寡核苷酸，退火成双链DNA，克隆入T载体，利用α互补跟T7／SP6PCR扩增筛选鉴定重组子pGEM-T-MTA1；用BgⅢ跟HindⅢ双酶切重组子pGEM-T-MTA1跟siRNA表白载体pSuperneo；将双粘MTA1发卡样siRNA片段亚克隆入siRNA表白载体pSuperneo中；利用BgⅢ跟HindⅢ双酶切筛选鉴定重组子pSuperneo-MTA1；对插入序列进行DNA序列分析。将siRNA表白载体pSupemeo-MTA1转入人骨肉瘤细胞系MG-63中，用RT-PCR方法检测细胞MTA1mRNA表白程度。成果1．得到116个候选MTA1siRNA靶区段，对上述候选序列通过美国生物技巧信息核心的在线同源序列检索，最后断定的编码序列是19个碱基，GACCCTGCTGGCAGATAAA(即481-499nt)。2．siRNA发卡DNA的退火后，电泳可见晶莹条带，位子约70bp处，与设计完全一致。3．退火产物与pGEM-（此处忽略..）TEasy连接后，转化JM109，筛选鉴定后得到重组子pGEM-T-MTA1。4．亚克隆后，用BgⅢ跟HindⅢ双酶切对重组质粒进行鉴定，得到pSuperneo-MTA1。5．对重组子pSuperneo-MTA1插入片段DNA序列测序，成果与设计完全一致。6．转染pSuperneo-MTA1的实验组骨肉瘤细胞中MTA1mRNA表白多少乎完全被克制，而两个对比组(无关siRNA对比组跟空载体对比组)跟未转染的骨肉瘤细胞系MG-63细胞中都存在较高程度的MTA1mRNA表白。论断1．设计出针对MTA1的发卡样siRNA寡核苷酸片段。2．成功构建出针对MTA1的siRNA表白载体pSuperneo-MTA1。3．pSuperneo-MTA1转染骨肉瘤细胞后能明显降落细胞MTA1mRNA表白。

以上为本篇毕业论文范文针对MTA1 mRNA的siRNA载体构建及其对基因沉默作用的介绍部分。

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