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1，3-丙二醇合成途径中关键酶的研究

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毕业论文范文题目：1，3-丙二醇合成途径中关键酶的研究，论文范文关键词：1，3-丙二醇合成途径中关键酶的研究
1，3-丙二醇合成途径中关键酶的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：本论文主要就克雷伯氏肺炎杆菌1,3-丙二醇生物合成途径动力学特性进行了研究。重点研究了甘油脱氢酶(GDH)的动力学模型。本研究首先利用大肠杆菌高效表达源于克雷伯氏肺炎杆菌的甘油脱氢酶，研究表明：大肠杆菌高效表达该酶的最佳诱导时间为6h，最佳诱导剂IPTG浓度为0.8mmol/L。通过超声波破碎，硫酸铵盐析、SephadexG-200凝胶层析和DE-23Cellulose阴离子交换层析对裂解液中的甘油脱氢酶进行提纯，提纯后酶液比酶活达到946U/mg。（此处忽略..）纯化倍数和回收率分别为2.58倍和37%。通过聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳测得该酶亚单个基的相对分子量约为39KDa。对甘油脱氢酶的性质研究表明，酶活性随pH值的升高而增大，反应温度50℃时酶活性最高。甘油脱氢酶催化双底物可逆反应，反应机理符合顺序Bi-Bi模型，动力学模型包含11个参数：KmNAD、KmGLY、KiNAD、Vf、KmDHA、KmNADH、KiNADH、Vr、Keq、KiGLY和KiDHA。本研究结合线性回归和非线性回归方（略..）法，逐步对这些参数进行了求解。首先利用简化模型通过线型回归计算KmNAD、KmGLY、KiNAD、Vf、KmDHA、KmNADH、KiNADH和Vr的近似解，接着固定KmNAD、KmGLY、KiNAD、Vf、KmDHA、KmNADH、KiNADH和Vr，利用非线性回归计算Keq、KiGLY和KiDHA的近似解，最后利用非线性回归计算完整模型的11个参数的精确解。计算获得参数KmNAD、KmGLY、KiNAD、Vf、KmDHA（略..）、KmNADH、KiNADH、Vr、Keq、KiGLY和KiDHA的精确解分别为：1924.47μmol/L、11300.10μmol/L、294.00μmol/L、262.5μmol/(L.min)、332.50μmol/L、95.00μmol/L、383.52μmol/L、3092.27μmol/(L.min)、0.00095、27768.37μmol/L、12.57μmol/L。本文利用PCR方法从克雷伯氏肺炎杆菌中克隆出了二羟基丙酮激酶的两个编码基因DHAKI、DHAKII，其片段大小分别是1.86kb和3.18kb。并用同样的方法从克雷伯氏肺炎杆（本文此处忽略..）菌中克隆出能够表达甘油脱水酶的编码基因GDHt，其大小为2.76kb。成功把三个基因片段分别连接到PDK6质粒上构建了重组质粒PDK6-DHAKI、PDK6-DHAKII、PDK_6-GDHt在大肠杆菌中进行高效表达。

以上为本篇毕业论文范文1，3-丙二醇合成途径中关键酶的研究的介绍部分。

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