番茄转录辅激活子LeMBF1在转基因材料中的功能分析

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番茄转录辅激活子LeMBF1在转基因材料中的功能分析

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毕业论文范文题目：番茄转录辅激活子LeMBF1在转基因材料中的功能分析，论文范文关键词：番茄转录辅激活子LeMBF1在转基因材料中的功能分析
番茄转录辅激活子LeMBF1在转基因材料中的功能分析毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：转录辅激活因子在真核基因表达中通过桥连转录因子/其他调控元件和基础转录装置起着十分重要的作用。根据转录辅激活因子的作用可将其分为两类:一类是促进或保持修饰染色质结构的酶的活性;一类是通过与转录因子结合促进一般转录装置与启动子的结合,多蛋白桥梁因子(multiproteinbridgingfactor1,MBF1)就属于这一类。MBF1是一个高度保守的关于内皮细胞分化、激素调节、脂类代谢、中枢神经系统发育和组氨酸新陈代谢等不同过程的转录辅激活蛋白,不同有机体的MBF1蛋白通过与C-Jun、GCN4、ATF1或其他核受体的相互作用连接TATA盒蛋白激活基因转录。植物MBF1s参与植物的生长发育和多种胁迫反应,超表达MBF1可以调节多种信号转导途径和激活多种防御因子的表达,提高植物对多种胁迫的（略..）抵抗力,如高温,干旱,病原菌侵染等,为培育高抗性的转基因作物提供了新的路径。目前在番茄中关于此基因还没有相关的报道,本论文拟通过在番茄中超表达MBF1基因研究其对逆境胁迫的抗性能力,从而明确MBF1基因的分子作用机制,主要研究内容及结果如下:1、再生番茄植株的获得将LeMBF1基因与经PstI酶切的pDH51载体连接形成中间载体,再经EcoRI酶切获得了包含35S启动子、MBF1基因、35S终止子的片段,此片段与经EcoRI酶切的pBIN19载体连接,构成双元表达载体质粒pBIN19-MBF1。以AC++番茄子叶为外植体,通过农杆菌LBA4404介导,将CaMV35S启动子调控下的MBF1基因转入番茄,经过50mg/LKan及500mg/L的Sm筛选,获得一部分生根的再生植株。2、Southern分析选择11个转化株系进行Sou（文章此处忽略..）thern分析,结果表明在这些转化株系中有8个是多拷贝,有3个是单拷贝。3、Northern分析选择04、05、08和09进行Northern分析,检测结果显示这4个株系中LeMBF1均获得表达。4、下游基因检验克隆番茄Actin、PR1、PR2、PR4、PR6、Pti4、HSP90、Apx2、CHS和Zat基因的片段,以Actin为内参,在AC++植株和转基因植株中进行半定量RT-PCR分析。结果显示:1)HSP90、Apx2、Zat、PR1、PR4和PR6基因的表达水平在LeMBF1超表达植株中均明显增强,LeMBF1正调控这些基因;2)CHS,PR2和Pti4基因的表达水平在AC++植株和转基因植株中没有明显变化,表达量基本一致。5、生物胁迫实验用芽孢杆菌侵染AC++和转基因植株的叶片,利用平板菌落计数法检测叶片上的菌落总数。结果显示（本文此处忽略..）:转基因植株对细菌的抵抗力显然比AC++植株强。用赤霉菌侵染AC++和转基因植株的叶片,以Actin为内参进行半定量RT-PCR分析下游防卫反应基因的表达。结果显示:1)在AC++植株中,LeMBF1、PR1、PR2、PR4、PR6和Pti4基因的表达水平明显增强。2)在转基因植株中,LeMBF1、PR2、PR4、PR6和Pti4基因的表达水平明显增强,但PR1基因的表达水平轻微减弱。3)与AC++植株相比,转基因植株中LeMBF1、PR2、PR4和Pti4基因的表达水平明显较高,而是PR1和PR6基因的表达水平反而低。LeMBF1可能通过激活部分PRs和Pti4基因的表达提高植物的抗病性。6、高温实验将AC++植株和转基因植株放置于39°C高温,统计植株在高温下的存活率。结果显示:转基因植株的耐热性比AC++植株强。利用半（此处忽略..）定量RT-PCR分析高温条件下防卫反应相关基因在AC++和转基因植株中的表达。结果显示:1)在AC++和转基因植株中,LeMBF1、PR1、HSP90、Apx2、CHS和Zat基因的表达水平均明显升高。2)与AC++植株相比,转基因植株中LeMBF1、PR1、HSP90、Apx2和Zat基因的表达水平明显较强,而CHS基因的表达水平在30min内较强,随后反而稍弱。LeMBF1可能通过激活PR1、HSP90、Apx2和Zat基因的表达提高植物的耐热性。

以上为本篇毕业论文范文番茄转录辅激活子LeMBF1在转基因材料中的功能分析的介绍部分。

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