铅对神经细胞信号传导通路中蛋白激酶C及钙调蛋白表达影响的研究

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铅对神经细胞信号传导通路中蛋白激酶C及钙调蛋白表达影响的研究

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毕业论文范文题目：铅对神经细胞信号传导通路中蛋白激酶C及钙调蛋白表达影响的研究，论文范文关键词：铅对神经细胞信号传导通路中蛋白激酶C及钙调蛋白表达影响的研究
铅对神经细胞信号传导通路中蛋白激酶C及钙调蛋白表达影响的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的研究铅对仔鼠海马、人神经胶质瘤细胞U251中的蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)的mRNA和蛋白表达的影响,以进一步探讨铅神经毒作用的分子机制,为铅中毒的防治工作提供理论依据。材料和方法1铅对仔鼠的学习记忆能力及相关指标的影响将孕鼠随机分为去离子水对照组、0.2%醋酸铅(Pb(Ac)_2)和1%Pb(Ac)_2组,从怀孕第0d起开始通过自由饮水染毒。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠浓度相同的含铅水。出生后(postnatal,PN)8d内行悬崖回避实验,PN50d行跳台实验,随后处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,乙酰胆碱酯酯酶试剂盒测定乙酰胆碱酯酶活力,RT-PCR法和Western-blotting法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的mRNA和蛋白表达情况。2铅对人神经胶质细胞瘤细胞U251细胞PKC、CaM表达的影响将U251细胞分为5×10~(-8)、5×10~(-6)、5×10~(-4)mol/LPb(Ac)_2染毒组和生理盐水对照组,接种密度为5.5×10~5个/ml,75cm~2细胞培养瓶每瓶接种5ml,培养24h贴壁后染毒,染毒24h。MTT实验观察铅对U251细胞存活率的影响,免疫细胞化学观察PKC和CaM在细胞中的定性表达,RT-PCR和Westernblot方法（文章此处忽略..）检测各组细胞中PKC和CaM的mRNA和蛋白表达水平。结果1铅对仔鼠的学习记忆能力及相关指标的影响(1)染铅组仔鼠的体重、身长均低于对照组(P＜0.01),且呈剂量反应关系。(2)染铅组PN8d和PN50d的仔鼠脑铅含量均高于对照组(P＜0.01),呈剂量反应关系;同剂量组PN50d与PN8d的仔鼠相比,脑铅含量明显增加(P＜0.01)。(3)染铅组平面翻正反射完成率均低于对照组(P＜0.01),1%Pb(Ac)_2组平面翻正反射完成率低于0.2%Pb(Ac)_2组(P＜0.01)。(4)染铅组悬崖回避完成率均低于对照组(P＜0.01)。1%Pb(Ac)_2组悬崖回避完成率低于0.2%Pb(Ac)_2组(P＜0.01)。(5)铅可显著降低仔鼠的学习记忆能力,染铅组仔鼠跳台实验反应时间延长、潜伏期变短、错误次数显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),且呈剂量反应关系。(6)PN8d1%Pb(Ac)_2组仔鼠海马的胆碱酯酶活力低于对照组(P＜0.01);PN50d的0.2%、1%Pb(Ac)_2组仔鼠海马的胆碱酯酶活力均低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),且呈剂量反应关系。(7)PN8d和PN-50d的1%Pb(Ac)_2组仔鼠海马的PKCmRNA相对表达量均低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),0.2%Pb(Ac)_2组仔鼠海马的PKCmRNA相对表达量与对照组比较差异均没有统计学意义(P＞0.05)。PN50d与PN8d相比,1%Pb(Ac)_2组PKCmRNA表达有（此处忽略..）下降趋势,但差异没有统计学意义(P＞0.05)。(8)PN8d和PN50d的0.2%、1%Pb(Ac)_2组仔鼠海马PKC蛋白相对表达量与对照组比较表达均降低(P＜0.01),且呈剂量反应关系。PN50d与PN8d相比,1%Pb(Ac)_2组PKC蛋白表达有下降趋势,但差异没有统计学意义(P＞0.05)。(9)PN8d的1%Pb(Ac)_2组仔鼠海马CaMmRNA相对表达量低于对照组(P＜0.05),但0.2%Pb(Ac)_2组与对照组比较差异没有统计学意义(P＞0.05);PN50d的0.2%和1%Pb(Ac)_2组仔鼠海马CaMmRNA表达均低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),且呈剂量反应关系。PN50d与PN8d相比,1%Pb(Ac)_2组CaMmRNA表达有下降趋势,但差异没有统计学意义(P＞0.05)。(10)PN8d1%Pb(Ac)_2组仔鼠海马CaM蛋白相对表达量与对照组比较表达降低(P＜0.01),而0.2%Pb(Ac)_2组与对照组比较差异没有统计学意义(P＞0.05);PN50d的0.2%、1%Pb(Ac)_2组仔鼠海马CaM蛋白相对表达量与对照组比较均降低(P＜0.05,P＜0.01),呈剂量反应关系。PN50d与PN8d相比,0.2%、1%Pb(Ac)_2组CaM蛋白表达均有下降趋势,但差异没有统计学意义(P＞0.05)。2铅对U251细胞中PKC、CaM表达的影响(1)5×10~(-6)、5×10~(-5)和5×10~(-4)mol/LPb(Ac)_2组的细胞存活率与对照组相比均降低(P＜0.01),且随剂量（文章此处忽略..）的增加存活率下降。(2)细胞免疫化学结果显示,PKC、CaM在U251细胞的胞质中均有表达。且随剂量的增加,阳性表达细胞率均下降。(3)5×10~(-4)mol/LPb(Ac)_2组PKCmRNA相对表达量低于对照组(P＜0.05);而5×10~(-8)、5×10~(-6)Pb(Ac)_2组PKCmRNA相对表达量与对照组比较没有减少(P＞0.05)。5×10~(-8)、5×10~(-6)、5×10~(-4)mol/LPb(Ac)_2组PKC蛋白相对表达量均低于对照组(P＜0.01),且随剂量的增加蛋白表达降低。(4)5×10~(-8)、5×10~(-6)、5×10~(-4)Pb(Ac)_2组的CaMmRNA和蛋白相对表达量均低于对照组(P＜0.01),且呈剂量反应关系。结论1通过孕期和哺乳期对母鼠染毒,铅可以在仔鼠的脑部蓄积;使仔鼠的学习记忆能力下降;降低胆碱酯酶的活力;使不同发育时期的仔鼠海马部位的PKC、CaM的mRNA和蛋白表达均降低,可能是铅影响仔鼠学习记忆能力的机制之一。2铅可以影响U251细胞的生长,使细胞存活率下降;使U251细胞中的PKC、CaM的mRNA和蛋白表达均降低,可能是铅对人体的神经毒性的机制之一。综上,动物实验与细胞学实验的结果一致。提示铅对信号传导通路中PKC、CaM的影响可能是其神经毒性的机制之一。

以上为本篇毕业论文范文铅对神经细胞信号传导通路中蛋白激酶C及钙调蛋白表达影响的研究的介绍部分。

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