红树林免疫增强真菌的筛选及菌株PH0016的鉴定

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红树林免疫增强真菌的筛选及菌株PH0016的鉴定

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毕业论文范文题目：红树林免疫增强真菌的筛选及菌株PH0016的鉴定，论文范文关键词：红树林免疫增强真菌的筛选及菌株PH0016的鉴定
红树林免疫增强真菌的筛选及菌株PH0016的鉴定毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的从海南红树林土壤层中分离和筛选具有免疫增强活性的真菌菌株,以多种免疫学检测方法评价其活性,并通过形态学和分子生物学手段鉴定其种属构成,探讨红树林真菌在免疫调节方面的应用价值。方法用海水马丁氏(Martin)培养基对采集自红树林5～20cm土层的真菌菌株进行分离及纯化培养,通过四氮唑蓝(MTT)法对其发酵上清进行免疫增强活性的筛选。对于具有免疫增强活性的菌株,进一步通过动物体内实验进行免疫学功能的评价。随机将KM小鼠分为实验组和对照组,分别给予真菌发酵上清物和生理盐水灌胃10d后再进行试验,检测项目包括小鼠免疫器官指数、溶血素测定、溶血空斑形成试验、迟发型变态反应(DTH)、巨噬细胞吞噬功能等。通过对菌株的形态和培养特征观察,结合分子生物学方法进行rDNAITS序列的测定及同源性分析,通过BLAST比对以及系统发育分析,确定其种属分类地位。应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。所有数据均用均数±标准差(X±S表示。对不同组别的测试结果进行单因素方差分析和组间的两两比较(SNK法),对小鼠灌胃前后的体重采用协方差分析,组间比较采用两样本的t检验,上述分析均采用双侧检验,检验水平为0.05,P0.05为差异有统计学（本文此处忽略..）意义。结果一、红树林真菌的分离及免疫增强菌株的筛选结果1.菌株分离结果：从东寨港红树林国家自然保护区土壤样本中共分离得到真菌325株。2.MTT法筛选活性菌株：用325株真菌的发酵上清对人外周血单个核细胞(PBMC)进行增殖刺激实验,分别以PHA和基础培养液作为阳性对照和阴性对照。结果发现有12株具有促进增殖作用,其中菌株P0016有较强效果。菌株P0016和阳性对照组与阴性对照组差异有显著性意义(F=408.741,P=0.000),两两比较结果菌株PH0016发酵上清对人外周血淋巴细胞的增殖刺激作用显著强于阴性对照组(P=0.000),而与阳性对照组比较无统计学差异(P=0.073)。二、菌株PH0016的免疫增强活性评价1.PH0016活性效应产物的粗提和检测：通过葡聚糖凝胶SephadexG-25柱层析法对菌株PH0016的发酵上清进行粗提,共分离获得20管提取物,再次以MTT法进行免疫活性的检测,其中第6管的作用最强,与阴性对照组的差异有显著性意义(P=0.000),与阳性对照组比较无统计学差异(P=0.135)。之后的KM小鼠体内试验均以第6管提取物为样品进行。2.PH0016提取物对小鼠生长状况和体重及脏器比值的影响：对小鼠灌胃前后的体重采用两样本的t检验及协方差分析证实,灌胃前实验组小鼠的体重与对照组间比较无显著性的差异（本文此处忽略..）(t=0,998,P=0.332),灌胃后两组小鼠的体重亦无显著性差异(F=1.037,P=0.324),说明发酵上清的提取物对小鼠体重增长无影响。灌胃后实验组小鼠的脾脏/体重比值与对照组比较无显著性差异(t=1.878,P=0.078),说明发酵上清的提取物对小鼠的脾脏/体重比值无影响。3.PH0016提取物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响：两样本的t检验分析结果显示,经灌服发酵上清冻干剂的小鼠足跖肿胀度明显高于对照组,差异具有显著性(t=3.858,P=0.001)。4.PH0016提取物对小鼠体液免疫功能的影响：两样本的t检验分析结果显示,PH0016提取物能明显增强实验组小鼠的HC50,实验组与对照组比较差异具有显著性(t=5.632,P=0.000)；其PFC水平与对照组比较,差异也具有显著性(t=2.855,P=0.008)。5.PH0016提取物对巨噬细胞吞噬功能的影响：镜下观察计数吞噬细胞吞噬情况时可见实验组巨噬细胞内的鸡红细胞较多,经统计学分析显示,实验组的吞噬指数显著高于对照组(t=3.268,P=0.003)。三、菌株PH0016的鉴定菌株在PDA培养基、查氏培养基和沙氏培养基3种固体培养基上均生长良好,在查氏培养基和PDA培养基生长7d左右直径可达15mm～18mm。菌落扁平、质地疏松、粉絮状、淡紫色。表面深紫色为产孢层,产孢旺盛,肉眼可见紫色孢（此处忽略..）子密集。菌落边缘质地疏松,呈白色。菌落背面颜色呈白色。光学显微镜下,营养菌丝壁光滑,无色透明。分生孢子梗光滑无色,单个小梗直立于营养菌丝上,瓶梗基部膨大,孢梗上具2～4个瓶梗状的轮生分枝。顶部锥形变细,形成一薄的独特的颈,分生孢子成向两侧分开的链状,有时缠在一起,分生孢子呈卵形或近球形,成熟后表面粗糙,透明无色,成团时呈紫色。以上特征与半知菌类(FungiImperfecti),丛梗孢目(Moniliales),丛梗孢科(Moniliaceae),瓶梗青霉属(PaecilomycesBainier)的分类特征相似。通过rDNAITS序列分析和同源性检索发现,菌株PH0016与拟青霉属相似性均为100%。因此,可以推断菌株PH0016的有性世代为子囊菌纲(Ascomycetes);肉座菌目(Hypocreales);麦角菌科(Clavicipitaceae);拟青霉属(Paecilomyces)。结论1.红树林土层中真菌资源丰富,本研究自东寨港红树林国家自然保护区土壤样本中共分离得到真菌325株。其中12株具有免疫增强作用。2.针对菌株PH0016的免疫学检测研究显示,其活性成分提取物对小鼠的T、B淋巴细胞和吞噬细胞的功能都具有明显的增强作用。3.经形态学（略..）和分子生物学鉴定手段,结合系统发育进化树的构建,表明该菌属于半知菌类(FungiImperfecti),丛梗孢目((Moniliales),丛梗孢科(Moniliaceae),瓶梗青霉属(PaecilomycesBainier)有性世代为子囊菌纲(Ascomycetes);肉座菌目(Hypocreales);麦角菌科(Clavicipitaceae);拟青霉属(Paecilomyces)。4.拟青霉属包括的种类丰富,分布广泛,生物学功能多样化,目前还没有从红树林中分离的报道。

以上为本篇毕业论文范文红树林免疫增强真菌的筛选及菌株PH0016的鉴定的介绍部分。

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