1，3-丙二醇氧化还原酶和醛还原酶基因的克隆与表达

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1，3-丙二醇氧化还原酶和醛还原酶基因的克隆与表达

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毕业论文范文题目：1，3-丙二醇氧化还原酶和醛还原酶基因的克隆与表达，论文范文关键词：1，3-丙二醇氧化还原酶和醛还原酶基因的克隆与表达
1，3-丙二醇氧化还原酶和醛还原酶基因的克隆与表达毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：1,3-丙二醇具有广泛的应用,特别是在聚酯合成工业上。微生物转化法生产1,3-丙二醇与化学法相比,具有明显的优点。近年来,微生物转化法越来越受到人们的重视。甘油歧化的氧化途径提供的NADH的量是有限的,从而限制了1,3-丙二醇的合成。代谢流分析表明,如果1,3-丙二醇氧化还原酶既能利用NADH,又能利用NADPH,将会增加1,3-丙二醇的产量。根据计算机模拟的结果,通过定点突变的方法将Asp41突变为甘氨酸,来改变该酶结合辅酶（此处忽略..）的特异性。酶活测定结果显示,突变酶分别以NADH和NADPH为辅酶时比酶活分别为629.38U/mg和277.35U/mg,而原始酶分别为706.90U/mg和20.95U/mg。原始酶对NADH的米氏常数(K_m)和转换数(k_(cat))分别为0.015mmol/L和90.641/s。突变酶对NADH的K_m和k_(cat)分别为0.48mmol/L和411.611/s,对NADPH的K_m和k_(cat)分别为0.14mmol/L和187.351/s。虽然突变酶利用两种辅酶的K_m都有所增加,但是利用NAD（文章此处忽略..）H的k_(cat)比原始酶提高3.54倍,利用NADPH的k_(cat)比原始酶提高1.07倍。以KlebsiellapneumoniaeDSM2026基因组为模板,利用PCR技术扩增得到醛还原酶的基因yqhD,将其连接到表达载体pET23a(+)上,重组质粒在E.coliBL21(DE3)中得到了高效表达。经过Q-Sepharose和SephacrylS-300两步柱层析纯化后,得到电泳条带单一的纯酶。以3-羟基丙醛为底物,测得该酶的比活力为3.8U/mg,（此处忽略..）而以1,3-丙二醇为底物时,检测不到酶活力。该酶的最适pH为5.8,最适温度为60℃。该酶可利用多种底物,对丁醛的酶活力最高,其次是3-羟基丙醛。该酶对NADPH和NADH的K_m值分别为0.07mmol/L和1.42mmol/L,表明它依赖辅酶的灵活性。在前期工作的基础上,构建了三个重组质粒pDK6-dhaT,pDK6-dhaT'和pDK6-yqhD,分别将三个重组质粒转化入KlebsiellapneumoniaeDSM2026。在摇瓶培养（略..）实验中,甘油的初始浓度为50g/L,构建的三株重组KlebsiellapneumoniaeDSM2026(pDK6-OX)的1,3-丙二醇产量均比对照有了明显的提高。

以上为本篇毕业论文范文1，3-丙二醇氧化还原酶和醛还原酶基因的克隆与表达的介绍部分。

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