胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA克隆与组织表达研究

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胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA克隆与组织表达研究

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毕业论文范文题目：胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA克隆与组织表达研究，论文范文关键词：胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA克隆与组织表达研究
胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA克隆与组织表达研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：α-淀粉酶以随机作用方式切断淀粉、糖原、寡聚或多聚糖分子内的α-1，4糖苷键，产生麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等，是广泛应用于葡萄糖生产、啤酒酿造、酒精工业、发酵以及纺织等许多行业中的一种重要的工业用酶。胭脂鱼是我国特有珍稀鱼类，为国家二级保护动物，具有个体大、生长快、肉质鲜美、性情温驯、抗病力强等特点。鱼类α-淀粉酶是碳水化合物水解酶类的一种，肝胰脏是α-淀粉酶中心生成器官，它分泌机能的强弱直接影响鱼类对食物的消化能力。很多的实验都表明α-淀粉酶的合成过程并不是由摄食所诱导的，而是鱼类自身发育的一种生命现象，其酶的合成与日龄有关。目前，还没有从分子水平阐明胭脂鱼α-淀粉酶的结构。本研究对胭脂鱼α-淀粉酶mRNA进行了克隆和序列测定分析，并进一步探讨了α-淀粉酶在鱼体各组织中的表达情况，这使我们可以更清楚地了解鱼体是在何部位利用食物中相应成分的，也为研究α-（本文此处忽略..）淀粉酶的分泌、贮存机制提供了途径。主要研究结果如下：1．胭脂鱼α-淀粉酶基因的全长cDNA序列在对多种硬骨鱼类的α-淀粉酶基因进行了多重比对后设计了2对特异性中间片断引物，以来自胭脂鱼肝胰脏的mRNA为模板扩增得到了胭脂鱼α-淀粉酶的中间片断序列。根据得到的中间片断序列设计了两条用于扩增α-淀粉酶基因的3’端的上游引物，用此两条上游引物和试剂盒提供的两条下游引物，扩增得到了胭脂鱼α-淀粉酶基因的3’端序列。再根据得到的中间片段序列和3’端序列设计了三组5’PACE特异性引物，从而得到了胭脂鱼α-淀粉酶的5’端序列。对所得到的三段序列进行拼接，得到了胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA序列，它全长1633bp，5’非编码区为24bp，编码区包括1539个核苷酸，编码一个长512个氨基酸残基的蛋白质前体，3’非编码区为70bp。2．胭脂鱼α-淀粉酶基因推导氨基酸序列的分析克隆得到的胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA全长（本文此处忽略..）为1633bp，包括一个5’非编码区、一个编码512个氨基酸的开放阅读框、TAA终止密码子和一个包括加尾信号和poly(A)尾的3’非编码区。编码区核苷酸长度为1539bp，编码512个氨基酸，由信号肽(15个氨基酸)、三个活性位点残基，三个氯离子结合位点残基，四个钙离子结合位点残基和10个半胱氨基酸残基构成。3．胭脂鱼α-淀粉酶基因的同源性分析胭脂鱼α-淀粉酶基因的核苷酸序列与许多动物的α-淀粉酶基因具有较强的相似性。在DNAMAN软件上对不同物种的α-淀粉酶基因cDNA全序列进行序列比对，结果表明，胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA序列的编码区与斑马鱼(Daniorerio)、尖吻鲈(Latescalcarifer)、美洲黄盖鲽(Pseudopleuronectesamericanus)、大西洋鲑鱼(Salmosalar)α-淀粉酶的cDNA序列的编码区的一致性为88.50％、78.30％、76.80％、72.51％，全序列的一致性为86.10％、75.26％、75.（文章此处忽略..）17％、70.73％。胭脂鱼α-淀粉酶在氨基酸水平的同源性高于核苷酸水平的同源性。胭脂鱼α-淀粉酶氨基酸与斑马鱼(Daniorerio)、尖吻鲈(Latescalcarifer)、美洲黄盖鲽(Pseudopleuronectesamericanus)、大西洋鲑鱼(Salmosalar)等鱼类α-淀粉酶氨基酸之间的相似性很高，分别为89.65％、82.03％、79.88％、74.80％；而与两栖类的光滑爪蛙(Xenopuslaevis)、哺乳类的猪(Susscrofa)以及人(Homosapiens)的相似性分别为76.39％、74.33％、71.88％。4．胭脂鱼α-淀粉酶基因推导蛋白的分析及其结构预测预测胭脂鱼α-淀粉酶基因编码一个512个氨基酸的多肽链，分子量Mw=56910.87Da，等电点pI=8.49。在氨基酸组成上，甘氨酸含量最高，为11.72％；其次是天冬酰氨、缬氨酸、亮氨酸及丝氨酸，分别为8.98％、7.42％、6.45％、6.05％。二级结构预测表明，其二级结构主要由四种组成，即α-（此处忽略..）螺旋、β-转角、随机卷曲和延伸链，随机卷曲是最主要的二级结构。5．胭脂鱼α-淀粉酶组织表达研究根据胭脂鱼α-淀粉酶cDNA序列，设计了两对基因特异性引物用于胭脂鱼α-淀粉酶组织表达研究，此外，根据金鱼的β-Actin序列设计了一对内参引物。PCR结果显示，在所研究的肝胰脏、前肠、中肠、后肠、肾脏、心脏、脾脏、脑、肌肉和鳃组织中，肝胰脏、前肠、中肠、后肠能检测到明显的α-淀粉酶表达，此外在心脏中也检测到了微弱的α-淀粉酶表达。

以上为本篇毕业论文范文胭脂鱼α-淀粉酶的cDNA克隆与组织表达研究的介绍部分。

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