二苯乙烯苷通过调节ROS-NO通路保护6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡

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二苯乙烯苷通过调节ROS-NO通路保护6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡

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毕业论文范文题目：二苯乙烯苷通过调节ROS-NO通路保护6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡，论文范文关键词：二苯乙烯苷通过调节ROS-NO通路保护6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡
二苯乙烯苷通过调节ROS-NO通路保护6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)是一种常见的神经系统退行性疾病。其主要病理特点为黒质致密部(Substantianigraparscompact,SNpc)含黑素的多巴胺(Dopamine,DA)能神经元选择性变性缺失,主要临床特点为静止震颤,肌僵直,姿态不稳以及运动缓慢。目前,PD的病因和发病机制尚不明确。但大量研究已经表明氧化应激和线粒体功能障碍与PD的发病机制密切相关。6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)是DA的一种羟化衍生物,广泛的用于PD体内外模型的建立。其具有神经毒性并且能够诱导体内外DA能神经元的凋亡。PC12细胞株来源于大鼠嗜铬细胞瘤,它具有类似于多巴胺合成、代谢和转运系统的功能,与中脑多巴胺能神经元特性十分接近。二苯乙烯苷(2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)是从中草药何首乌中提取的有效活性成分之一。其具有抗氧化,抗炎,以及改善学习记忆的作用。有研究已经证实TSG可改善老年痴呆小鼠的学习记忆能力,具有神经保护作用。最近,我们的研究表明TSG对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。为了进一步研究TSG的神经保护作用,本研究选择与DA能神经元特性相似的PC12细胞和具有神经毒素的6-OHDA建立（本文此处忽略..）体外PD模型,观察TSG对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡是否有保护作用,并对其作用机制做初步探讨。【目的】1.用神经诱导因子处理细胞使之具有类似DA的性能。2.建立PD体外模型,筛选出6-OHDA诱导PC12细胞凋亡的有效浓度和TSG对6-OHDA诱导PC12细胞凋亡的有效保护浓度;3.观察TSG对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡的影响;4.研究TSG减轻6-OHDA诱导PC12细胞凋亡可能的机制。【方法】1.设立空白对照组,25,75,100,125,150,200和300μmol/L6-OHDA浓度组作用于PC12细胞24h,筛选6-OHDA实验处理有效浓度,筛选出6-OHDA有效浓度为75μmol/L;设立空白对照组,1,5,10,20,50,100,200μmol/LTSG浓度组作用PC12细胞24h,观察TSG单独处理细胞对细胞的影响;设立空白对照组,1,5,10,20,50,100,200μmol/LTSG浓度组作用PC12细胞24h,再用6-OHDA(75μmol/L)处理24h,筛选TSG实验处理有效浓度,筛选出最佳TSG预处理组浓度为10,20,50μmol/L。2.设立正常对照组,单独TSG处理组,6-OHDA处理组,不同浓度TSG预处理组(10,20,50μmol/L),用MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色观察细胞核形态变化;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡百分率;TUNEL染色观察细胞DNA断裂情况;3.通过全自动荧光酶标仪检测细胞内ROS和NO水平;4.通过（本文此处忽略..）Elisa检测试剂盒检测3-NT蛋白水平;5.通过WesternBlot法检测细胞中iNOS和nNOS蛋白的表达水平;【结果】1.MTT比色法检测观察,与对照组相比,75μmol/L6-OHDA处理PC12细胞24h后细胞活力为(52.6±1.3)%(P0.01)。TSG预处理细胞24h后,再用75μmol/L6-OHDA处理24h,与6-OHDA组(52.6±1.3)%相比,10,20,50μmol/LTSG预处理组细胞活力分别上升为(66.6±3.2)%(P0.01),(73.0±1.6)(PO.01)和(83.9±1.5)%(P0.01)。单独不同浓度TSG(1,5,10,20和50μmol/L)对细胞活力无明显影响;但是高浓度TSG(100,200μmol/L)对细胞活力有抑制趋势。2.Hoechst33258染色观察到,正常细胞核显示蓝色,均匀淡染,边缘光滑整齐,6-OHDA处理组细胞核呈致密浓染,细胞染色质皱缩,显示亮蓝荧光,甚至可见细胞核断裂,呈现致密的颗粒荧光。而用TSG(10,20和50μmol/L)预处理细胞后,上述细胞凋亡特点明显改善。单独TSG处理组对细胞形态学无明显影响。3.FCM结果显示,正常组,仅TSG组,6-OHDA处理组,TSG(10,20和50μmol/L)预处理组凋亡细胞百分率分别为1.8%,1.6%,35.2%,30.7%和18.7%,13.6%。4.TUNEL染色显示,与正常对照组(4.8±1.4)%相比,6-OHDA组TUNEL阳性细胞数增加到(30.6±2.0)%(P0.01),而TSG(10,20和50μmol/L)组TUNEL阳性细胞数则分别下降为(22.8±1.0)%(P0.01),(19.4±0.9)(P0.01)和(11.6±1.1)%(P（本文此处忽略..）0.01)。仅TSG组对细胞形态无明显影响。5.全自动荧光酶标仪检测ROS和NO观察到,与正常对照组细胞内ROS水平(99.8±3.1)%相比,6-OHDA组细胞内ROS水平增加到(178.4±9.4)%(P0.01),而TSG(10,20和50μmol/L)预处理组细胞内ROS水平则分别下降为(169.6±8.8)%,(156.0±9.1)%(P0.01),(119.2±7.4)%(P0.01);仅TSG组对细胞内ROS影响不明显。与正常对照组细胞内NO水平(98.8±4.1)%相比,6-OHDA组细胞内NO水平增加到(308.6±23.6)%(P0.01),而TSG(10,20和50μmol/L)预处理组细胞内NO水平则分别下降为(287.6±23.2)%,(236.0±34.8)%,(158.0±14.6)%(P0.01),仅TSG处理对细胞内NO影响不明显。6.Elisa检测试剂盒检测3-NT显示,与正常对照组细胞内3-NT水平(4.4±0.3)%相比,6-OHDA组细胞内3-NT水平增加到(18.2±0.8)%(P0.01),而TSG(10,20和50μmol/L)预处理组细胞内3-NT水平则分别下降为(16.7±0.9)%,(14.6±1.3)%(P0.05),(10.1±0.7)%(P0.01),仅TSG处理对细胞内3-NT影响不明显。7.WesternBlot方法检测结果表明,TSG(10,20和50μmol/L)预处理组iNOS和nNOS表达水平较6-OHDA处理组明显依次减弱。【结论】1.在一定浓度范围内,TSG以剂量依赖的方式能够减轻6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡。2.TSG减轻6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡与调节ROS-NO通路有关。

以上为本篇毕业论文范文二苯乙烯苷通过调节ROS-NO通路保护6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡的介绍部分。

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