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NPC乳鼠Purkinje细胞原代培养及Ca~(2+)动力学特征和小鼠小脑氨基酸测定

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NPC乳鼠Purkinje细胞原代培养及Ca~(2+)动力学特征和小鼠小脑氨基酸测定毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】:第一部分NPC乳鼠Purkinje细胞原代培养及细胞Ca~(2+)电流和Ca~(2+)动力学特征目的建立简单有效的NPC乳鼠Purkinje细胞原代培养方法,初步研究其细胞电生理特性,并将培养细胞用荧光染料Fluo-3/AM标记后在共聚焦显微镜下测定细胞内Ca~(2+)浓度,比较NPC-/-乳鼠及野生型乳鼠培养细胞各观察指标之间的差异。方法钝性分离生后(略..)24h内的乳鼠小脑,采用低浓度胰蛋白酶加机械吹打法获得单细胞悬液,然后用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养,24h后更换为1%N~(2+)1%T3+1%谷氨酰胺的DMEM/F12维持培养,3-5d后进行细胞免疫荧光染色,5-7d后在共聚焦显微镜下测定Purkinje细胞内基础荧光强度值以及加入KCL溶液(60umol/l)以及NBQX(AMPA受体阻滞剂)后荧光强度值的变化,利用相应软件处(文章此处忽略..)理后得出细胞内Ca~(2+)浓度测定结果,7-9d后用全细胞膜片钳单通道法记录钙电流。结果该方法培养的神经元形态典型,细胞学鉴定阳性率高(70%),并记录到钙通道电流,且NPC-/-乳鼠培养细胞Ca~(2+)浓度高于野生型乳鼠。结论该方法取材容易,操作简单,培养的Purkinje细胞生长状态良好,活性较高,可用于电生理和Ca~(2+)动力学研究。聚焦;细胞内Ca~(此处忽略..)(2+)浓度测定第二部分质谱分析法测定五周龄NPC小鼠小脑皮层3种氨基酸含量目的测定五周龄NPC小鼠小脑皮层氨基酸含量,比较NPC-/-小鼠与野生型小鼠小脑内氨基酸含量的差异。方法用微透析技术收集小鼠小脑皮层细胞外液中氨基酸,质谱分析法测定透析液中谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)的含量。结果质谱分析法可快速准确测定小脑皮层中氨基(略..)酸的含量,但NPC-/-小鼠与野生型小鼠小脑内3种氨基酸含量无显著性差异。结论五周龄NPC-/-与野生型小鼠相比,3种氨基酸含量无明显改变,氨基酸类神经递质可能不参与此期NPC-/-小鼠的病理改变。


以上为本篇毕业论文范文NPC乳鼠Purkinje细胞原代培养及Ca~(2+)动力学特征和小鼠小脑氨基酸测定的介绍部分。
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