长白山白眉蝮蛇磷脂酶A_2的基因工程研究

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长白山白眉蝮蛇磷脂酶A_2的基因工程研究

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毕业论文范文题目：长白山白眉蝮蛇磷脂酶A_2的基因工程研究，论文范文关键词：长白山白眉蝮蛇磷脂酶A_2的基因工程研究
长白山白眉蝮蛇磷脂酶A_2的基因工程研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：根据实验室从长白山白眉蝮蛇中纯化的磷脂酶A_2的N端氨基酸测序和肽质谱分析结果，设计特异性引物，通过3′-RACE和RT-PCR分离出了编码该蛋白的基因。该基因含有366个核苷酸，编码122个氨基酸。氨基酸序列分析和三级结构模拟表明，分离得到的磷脂酶A_2具有第Ⅱ类磷脂酶A_2的典型结构；分离得到的磷脂酶（此处忽略..）A_2位氨基酸残基是Gln，是一种新的磷脂酶A_2，命名为Gln49-PLA_2：Gln49-PLA_2没有磷脂酶A_2的活性，可能是Gln残基与钙离子的电荷不相容而干扰了钙离子的结合所致。磷脂酶A_2的序列对比分析结果表明，Gln49-PLA_2和Asp49-PLA_2s的同源性(93％-61％)要高于Lys49-PLA_2s(60％-56％（文章此处忽略..）)；进化树分析结果也表明，Gln49-PLA_2和Asp49-PLA_2s的亲缘关系要近于Lys49-PLA_2s。将Gln49-PLA_2基因克隆到表达载体pET-32a(+)中，经热激转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过IPTC诱导，Gln49-PLA_2基因在大肠杆菌中得到了可溶性表达。Westernblot显示，纯化后的目的蛋（此处忽略..）白能与天然Gln49-PLA_2免疫得到的鸡抗Gln49-PLA_2免疫球蛋白(IgY)产生抗原-抗体反应。优化培养条件表明在30℃诱导6小时，Gln49-PLA_2得到了较高水平的可溶性表达，目的蛋白在可溶组分中相对含量达到19.6％。通过固定化金属亲和层析、阴离子交换、疏水层析融合蛋白得到了纯化，其纯度可达91％。重组（文章此处忽略..）Gln49-PLA_2具有明显的抗凝血活性，并对Hela细胞的生长有抑制作用，其IC_(50)为2.8μmol/L。

以上为本篇毕业论文范文长白山白眉蝮蛇磷脂酶A_2的基因工程研究的介绍部分。

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