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hwtx-Ⅰ基因四价体表达载体构建及苏云金芽孢杆菌工程菌株研究
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毕业论文范文题目:
hwtx-Ⅰ基因四价体表达载体构建及苏云金芽孢杆菌工程菌株研究
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hwtx-Ⅰ基因四价体表达载体构建及苏云金芽孢杆菌工程菌株研究
hwtx-Ⅰ基因四价体表达载体构建及苏云金芽孢杆菌工程菌株研究毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】
:苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)编码杀虫晶体蛋白(InsecticidalCrystalProteins,ICPs)的cry基因中cry1类基因的启动子是一类芽孢依赖型启动子,从芽孢形成T_2期开始被激活。虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(Huwentoxin-Ⅰ,简称Hwtx-Ⅰ)是虎纹捕鸟蛛分泌产生的一类乙酰胆碱受体阻断剂,作用于神经肌肉的连接处,能阻断神经肌肉的信号(略..)传导,其溶液构象为三对二硫键和三股反平行β折叠的抑制剂胱氨酸结构模体。同时,其生物学活性表明也是一种N型Ca~(2+)离子通道的阻断剂。本研究根据已知的Hwtx-Ⅰ氨基酸序列,按照苏云金芽孢杆菌偏爱密码,将氨基酸序列转换成核苷酸序列,并将其基因单价体分片段化学合成。将合成片段磷酸化并退火连接。同时设计一段含有核酸内切酶SpeⅠ和XbaⅠ位点的衔接子linker,利用这两种内切酶酶切(略..)后的粘性末端互补这一特性,可将hwtx-Ⅰ基因头尾串联形成四价体。带有Bt杀虫晶体蛋白基因cry1Ac的质粒pUA19经内切酶BsaBI和MunI酶切后,去掉了cry1Ac基因的ORF,只剩下cry1Ac基因的上游启动子序列和下游终止子序列。将设计的linker片段插入此位点,得到pUAK质粒,利用内切酶SpeⅠ和XbaⅠ双酶切后将已退火连接好的hwtx-Ⅰ基因插入其中,得到质粒pUK(本文此处忽略..)H1。将质粒pUKH1分别用SalⅠ/SpeⅠ和SalⅠ/XbaⅠ双酶切回收其中目的片段,连接后得到质粒pUKH2,将此质粒分别用SalⅠ/JpeⅠ和SalⅠ/XbaⅠ双酶切回收其中目的片段,连接后得到质粒pUKH4。将pUKH4用SalⅠ和BamHⅠ双酶切回收1.1kb片段,与同样双酶切的大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌的穿梭载体pHT304连接得到表达质粒pXH4。将pXH4分别电转入苏云金芽孢杆菌无晶(文章此处忽略..)体突变株XBU001和野生型菌株Bt4.0718中,Hwtx-Ⅰ四价体在苏云金芽孢杆菌转化子中得到表达,蛋白质定量分析显示目的蛋白摇瓶发酵表达量达到14.0mg/L。目的蛋白在XBU001的重组子UH04中占可溶性蛋白总量的11.48%,在Bt4.0718的重组子Bh4-4中占可溶性蛋白总量的4.51%。生测结果显
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hwtx-Ⅰ基因四价体表达载体构建及苏云金芽孢杆菌工程菌株研究
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