烟草rbcS启动子的克隆及转SLC1-1基因烟草的研究

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烟草rbcS启动子的克隆及转SLC1-1基因烟草的研究

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毕业论文范文题目：烟草rbcS启动子的克隆及转SLC1-1基因烟草的研究，论文范文关键词：烟草rbcS启动子的克隆及转SLC1-1基因烟草的研究
烟草rbcS启动子的克隆及转SLC1-1基因烟草的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：烟草是重要的叶用经济作物,作为模式植物对生物技术的发展起到了重要作用。为了有效启动外源基因在烟草叶部特异性表达并改良烟叶品质,本研究从烟草叶片中克隆了rbcS启动子,并将SLC1-1基因(编码sn-2Acyltransferase)转化烟草,分析了转基因烟草叶片中的粗脂肪含量。结果如下:1、根据根据NCBI已发表的烟草核酮糖1,5-二磷酸加氧酶/羧化酶(X02353)设计引物,采用RT-PCR从烟草(Nicotianatabacum)栽培种NC89基因组中分离了rbcS启动子序列,扩增片段长度979bp。PlantCARE序列分析表明,该启动子含有多处保守序列,而且越（略..）靠近起始密码子区域序列越保守,该启动子序列除含有启动子必需的CAAT框、TATA框外,还含有G-box、I-box、boxI、boxII、ATC-motif等十二种与光响应有关的元件,另外,还含有一个ABA顺势作用元件(ABRE)、两个MeJA响应元件、一个乙烯响应元件及一个烟草特有的5′-tcttaCACGTGgcacctc-3′保守序列。与GenBank:X02353比对表明,从烟草NC89克隆的rbcS启动子序列在TATA-box、CAAT-box、G-box等重要功能区域没有发现碱基的改变,但在其他区域存在7处碱基的突变,包括4处碱基替换和3处（略..）碱基插入,对应区域同源性为99%。2、构建植物表达载体rbcS:pBI121,以35S:pBI121为阳性对照转化烟草,所得阳性植株进行GUS染色,进行功能验证。分析结果表明,烟草rbcS启动子具有叶部组织特异性,且在叶部启动基因表达能力较CaMV35S启动能力强,从而为外源基因在转基因烟草叶片中的高效表达提供了新的工具,为后续目的基因能在烟草叶部发生组织特异性和光诱导性表达奠定了基础。3、分别构建了35S:SLC1-1和rbcS:SLC1-1基因表达载体,转化烟草,并对转基因烟草的粗脂肪进行了检测。结果表明转基因烟草粗脂肪含量平均提高0.57个百分点,最高者较对照提高了（略..）1.3个百分点,说明通过烟草生物技术提高烟草油份含量是可行的。4、检测了转基因烟草的表型变异情况,通过花粉萌发试验,花器官冰冻切片试验和旁侧序列分析,初步分析造成转基因烟草器官变异的原因。突变株的表型变化表现在叶片变小变细,主脉在叶尖处分叉,向两边延伸。一株花序不展开,花序柱较正常短,无花朵形成;另一株开花数目较少,仅有几朵花形成,无花萼,花冠顶端部分缺失,观察花柱和花丝发现,有的花柱和花丝生长在一起,还有一些只有四个花丝,或吴个花丝中有一至几个发育不正常。花粉萌发试验显示和正常花粉活力无差别,切片观察可见花蕾在较小时就发生了枯萎（此处忽略..）。对旁侧序列分析显示SLC-9植株可能和己糖激酶基因或alata48A基因有关;SLC-10植株旁侧序列比对未找到同源的基因序列,证明其插入的位置有可能为非编码区的基因组序列。同时通过对转基因旁邻序列分析发现,T-DNA整合进烟草基因组时在T-DNA边界和侧邻的烟草基因组序列结合处,常会出现短的填充序列和微同源序列,说明T-DNA在烟草基因组中的整合即存在双链断裂修补机制,又存在单链裂缝修补机制。

以上为本篇毕业论文范文烟草rbcS启动子的克隆及转SLC1-1基因烟草的研究的介绍部分。

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