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金盏菊再生体系的建立和遗传转化初探

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毕业论文范文题目：金盏菊再生体系的建立和遗传转化初探，论文范文关键词：金盏菊再生体系的建立和遗传转化初探
金盏菊再生体系的建立和遗传转化初探毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：金盏菊(CalendulaofficinalisL.)为菊科金盏菊属植物,一年生或越年生草本。金盏菊原产欧洲,在欧洲栽培历史较长,广泛用于家庭小花园和盆栽观赏。在城市街旁的栽植槽和零星墙角花坛中,金盏菊是早春主角之一。我国金盏菊的栽培,是18世纪后从国外传入的,新中国成立后,金盏菊在园林中广泛栽培,应用于盆栽观赏和花坛布置。20世纪80年代后重瓣、大花和矮生金盏菊引入我国,金盏菊的面貌焕然一新,现已成为我国重要草本花卉之一。除了作为园林观赏花卉以外,金盏菊还是一种很有发展前途的经济植物,可作为很好的化妆品、药品等。但金盏菊特别容易遭受虫害,尤其是在早春花期,这就在一定程度上制约了金盏菊的应用和推广。通过（此处忽略..）根癌农杆菌介导的方法,将胰蛋白酶抑制剂基因Cpkti转入金盏菊基因组中,培育出具有抗虫功能的新品种,并为利用转基因技术改良金盏菊品种的广泛运用打下基础,对金盏菊在全国大面积推广应用,更好的为园林绿化服务具有重要意义。本研究以金盏菊叶片外植体为供试材料,初步探讨了金盏菊再生体系和根癌农杆菌介导的遗传转化的体系。其主要研究结果如下：1金盏菊再生体系的建立以金盏菊的幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同浓度的6-BA和NAA设计不同的培养基,研究金盏菊叶盘的最适分化条件。从而初步建立了金盏菊的再生体系。叶片表面灭菌方式为：先75%乙醇浸泡30s,然后0.1%升汞浸泡10min。愈伤组织诱导培养基为:MS+（本文此处忽略..）6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L+3%蔗糖+7g/L卡拉胶,愈伤组织诱导率高达100%；分化培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+3%蔗糖+7g/L卡拉胶,分化率可达90%,繁殖系数为4.5。生根培养基为：1/2MS+NAA0.1mg/L+3%蔗糖+7g/L卡拉胶,经过12天左右可诱导出根,生根率可达100%。2金盏菊遗传转化体系的初步研究在建立了金盏菊再生体系的基础上,对金盏菊进行了抗生素的敏感性试验,结果表明：金盏菊对卡那霉素比较敏感,培养基中添加10mg/L卡那霉素,能抑制叶盘分化,培养基中添加10mg/L卡那霉素,无菌苗难以生根。因此,10mg/L卡那霉素可以作为筛选培养基中的抗生素配方；实验表明,500-300mg/L浓度的羧苄青霉素能有效的抑（略..）制农杆菌的生长,而且几乎不影响叶片外植体的再生率和不定芽数,可作为金盏菊的抑菌性抗生素。以金盏菊无菌苗的叶片作为外植体,并利用根癌农杆菌介导的遗传转化法将胰蛋白酶抑制剂基因Cpkti转入金盏菊中,对影响转化效率的因素进行了初步研究,探讨了预培养时间,农杆菌菌液浓度,侵染时间,共培养时间,以及延迟筛选时间对金盏菊遗传转化的影响。结果表明以上因素是农杆菌介导的金盏菊遗传转化的重要影响因素。优化后的遗传转化体系为：将第二次活化后OD600值为1.0的农杆菌菌液离心后收集菌体,加入液体MS+AS100um/L+MES0.1%(PH=7.0),重悬到OD600值为0.4-0.5。将预培养2d的叶盘置于重悬后的菌液中侵染15min,在MS+6-BA1m（本文此处忽略..）g/L+NAA0.1mg/L的共培养基中,暗培养2d；振荡脱菌30min后,在分化培养基中延迟培养2d,按5mg/L-10mg几卡那霉素逐渐递增的方式连续筛选直至有不定芽生成。羧苄青霉素的浓度开始时为500mg/L,后期为300mg/L。抗性芽在添加10mg/L卡那霉素的生根培养基中进行生根培养。对所得抗性植株进行GUS瞬时表达检测和PCR扩增检测表明：胰蛋白酶抑制剂基因已成功转入金盏菊中。

以上为本篇毕业论文范文金盏菊再生体系的建立和遗传转化初探的介绍部分。

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