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人Toll样受体9基因克隆及真核重组载体的构建
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人Toll样受体9基因克隆及真核重组载体的构建
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人Toll样受体9基因克隆及真核重组载体的构建
人Toll样受体9基因克隆及真核重组载体的构建毕业论文范文介绍开始:
【论文摘要】
:Toll样受体9(Toll-LikeReceptor9,TLR9),是重要的模式识别受体,识别一组具有特定结构的寡核苷酸序列CpG,其广泛地存在于病原体中。TLR9在识别病原体和激活天然免疫方面起着非常重要的作用。激活的TLR9不但能够诱导天然免疫应答,并且有助于特异性免疫反应的发生。TLR9能够介导CpG对多种免疫细胞的激活,例如巨噬细胞、B细胞、DC细胞;由此,将使细胞表面CD40、(文章此处忽略..)CD80、CD86等共刺激分子以及MHCII类分子表达增加,而且促使细胞因子IL-6,、IL-12,、TNF、IFN-γ、IFN-α等的分泌,从而诱导Th1型免疫应答。除参与诱导的细胞活化,TLR9还能通过延长活化DC细胞的寿命,抑制细胞凋亡,稳定Th1型免疫应答。通过CpG与TLR9的作用,DC细胞等抗原提呈细胞能够交叉提呈外源性抗原,从而交叉激活CD8+细胞。TLR9过度激活,反而会抑制D(略..)Cs成熟,使调节性T细胞增多。TLR9是连接获得性免疫和天然免疫的桥梁。TLR9基因具有多态性,会影响TLR9受体蛋白的表达和功能活性,使机体的天然免疫功能受限,与机体对感染性疾病的易感性密切相关。本研究从人外周血细胞中提取总RNA,利用逆转录PCR(Reversetranscript-polymerasechaieaction,RT-PCR)扩增TLR9基因的cDNA序列.通过(略..)TA克隆,将TLR9插入PMD18T。通过蓝白筛选,筛选出阳性克隆。应用亚克隆技术,将TLR9基因与pcDNA3.0载体重组,经质粒提取初筛、双酶切鉴定正确构建了真核表达质粒pcDNA3.0-TLR9。将重组基因转化入感受态细胞JM109中,得到重组质粒的工程菌。测序结果表明,与Genbank的TLR9比对结果相同,有四处碱基发生置换。其中1635bp和3036bp处,均为简并碱基,编码的氨基酸不变。209bp处,(文章此处忽略..)t置换为c,编码的氨基酸由色氨酸变为丝氨酸。3057bp处,c置换为g,编码的组氨酸变为谷氨酰氨。本研究得出的结果能够进一步研究TLR9及其配体的表达和生物学活性,建立稳定表达TLR9的细胞系。为与TLR9相关的免疫及炎症方面的疾病研究和治疗提供新的思路。
以上为本篇毕业论文范文
人Toll样受体9基因克隆及真核重组载体的构建
的介绍部分。
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