牛支原体的分别鉴定及其GAPDH基因片段的克隆表白

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牛支原体的分别鉴定及其GAPDH基因片段的克隆表白

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牛支原体的分别鉴定及其GAPDH基因片段的克隆表白毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：牛支原体(Mycoplasmabovis)是一种无细胞壁的原核生物,常存在于牛的呼吸道跟生殖道,当牛只长途运输,或免疫力低下时轻易被感染,引起重大肺炎、乳腺炎,还可导致关节炎、角膜结膜炎、耳炎、生殖道炎症、流产或不孕等多种疾病。牛支原体病在世界范畴内存在,重大侵害了养牛业的经济好处：欧洲每年因牛支原体引起的犊牛肺炎经济丧失为1.44-1.92亿欧元；近年在我国湖北、贵州、宁夏、内蒙古、广西、重庆等省、自治区的牛群中也风行该病。目前国内外缺乏保险有效的牛支原体疫苗,是造成该病多处风行的起因之一为了确诊重庆某肉牛场暴发的呼吸体系疾病,本研究通过病原分别培养、16SrRNA序列测定跟牛支原体特异性（文章此处忽略..）基因扩增,断定分别株为牛支原体。为了筛选一个实用于牛支原体疫苗出产的抗原蛋白,采取生物信息学软件分析了牛支原体GAPDH基因的免疫学信息,筛选了抗原指数较高的片段进行克隆表白。通过动物实验、Western-blot实验跟间接ELISA实验分析了重组蛋白的生物学活性,为牛支原体基因工程疫苗的研制提供了参考根据。本实验内容包含以下多少个方面：1牛支原体分别株的PCR鉴定扑杀存在肺炎临床症状的病牛,无菌采集肺脏组织,采取实验室病原分别技巧进行病原分别纯化。在5%CO2培养箱37℃前提下培养的马丁氏培养基中,分别到一小菌落,40倍显微镜下察看菌落呈“煎蛋样”,命名为CQ1。设计合成支原体16SrRNA（此处忽略..）通用引物跟牛支原体oppD/F基因特异性引物,利用PCR方法鉴定分别株。成果表明,该分别株16SrRNA序列与牛支原体PG45株(登录号：AF332756)类似性为99.9%,与无乳支原体(登录号：AY526879)类似性为99.3%。利用牛支原体oppD/F基因特异性引物,扩增出了1900bp的目标片段,经测序比对,与牛支原体oppD/F基因序列反复率为100%。通过药物敏感性实验跟动物实验,初步摸索了分别株的药物敏感性跟毒力。该分别株对环丙沙星、氧氟沙星、四环素、壮观霉素敏感性较高。经胸腔跟滴鼻攻毒BABL/c小鼠、昆明小鼠、新西兰大白兔、Z:ZCLA长爪(?)鼠,不致逝世实验动物。2牛支原体GAPDH基因片段的克隆表白以牛支原体PG45株的GAP（文章此处忽略..）DH基因序列为模板,分析其免疫学信息,筛选抗原指数较高的280～921bp序列为目标片段进行克隆表白。利用SDS-PAGE检测重组蛋白表白情势跟表白量。重组质粒pET-32a(+)/GAPDH在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中以可溶性蛋白情势高效表白。3重组蛋白的免疫活性分析将分别株全菌蛋白制成油乳剂疫苗免疫家兔,通过琼脂扩散实验检测多克隆抗体系备后果。多克隆抗体与全菌蛋白构成积淀线的最高稀释比为1：32,多克隆抗体能与纯化后的重组蛋白构成单一积淀线。利用Western_blOt实验验证了重组蛋白与多克隆抗体能特异性结合,存在较强的反应原性。将重组蛋白作为包被抗原尝试构建间接ELISA辨别诊断方法,成果表明（此处忽略..）该方法不能正确辨别阴阳性血清,特异性不高。综上所述,本次研究分别到了一株牛支原体,为后续实验提供了实验材料；该分别株GAPDH基因的280～921bp序列片段在大肠杆菌表白体系中能以可溶性蛋白情势成功表白,便于重组蛋白的分别纯化；多克隆抗体琼脂扩散实验、Westem-blot实验跟间接ELISA实验成果表明,重组蛋白有较好的免疫原性跟反应原性,为进一步研制基因工程疫苗提供实验根据,但不实用于诊断方法的构建。

以上为本篇毕业论文范文牛支原体的分别鉴定及其GAPDH基因片段的克隆表白的介绍部分。

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