橙汁与柑橘园中脂环酸芽孢杆菌的分离鉴定与检测研究

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橙汁与柑橘园中脂环酸芽孢杆菌的分离鉴定与检测研究

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毕业论文范文题目：橙汁与柑橘园中脂环酸芽孢杆菌的分离鉴定与检测研究，论文范文关键词：橙汁与柑橘园中脂环酸芽孢杆菌的分离鉴定与检测研究
橙汁与柑橘园中脂环酸芽孢杆菌的分离鉴定与检测研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：脂环酸芽孢杆菌可造成巴氏灭菌的果汁腐败,影响果汁的品质,引起国际的关注,已成为果汁国际贸易技术壁垒的新内容。国际贸易中严格要求每10mL浓缩果汁中脂环酸算芽孢杆菌的含量小于1个。而我国在脂环酸芽孢杆菌分离、检测方法等方面的研究较少,且仅侧重于苹果汁中脂环酸芽孢杆菌的研究,对橙汁中脂环酸芽孢杆菌研究较少。因此,对橙汁与柑橘园中脂环酸芽孢杆菌的分离、鉴定与检测技术这对我国橙汁生产和贸易都具有十分重要的意义。本文以柑橘园及不同橙汁中分离得到的13株具有耐酸耐热性的菌株为研究材料,首先对其进行了菌落形态、培养基气味、耐酸性、耐热性、革兰氏染色等常规检测；随后对分离菌株进行了16SrDNA序列聚类分析；研究了分离菌株的16SrDNAPCR-RFLP限制性酶切特征图谱,并进行了聚类分析；此外（略..）,还根据脂环酸芽孢杆菌的16SrDNA设计了一对特异性强,灵敏度高的引物。具体研究结果如下：(1)选用BAT培养基在45℃2-5d的培养条件,从橙汁及柑橘园中分别分离得到8株和2株脂环酸芽孢杆菌。因此,BAT培养基在45℃2-5d的培养条件,可作为橙汁中脂环酸芽孢杆菌的选择性培养基。(2)本研究以分离菌株NFC-1为研究材料,对其生长曲线进行了研究,结果表明该菌经过18h培养后进入对数生长期,在25h菌体浓度能达到最高,随后进入稳定生长期。从而确定该菌的基因组DNA提取条件为：225r／min45℃气浴摇床培养25h。(3)对13株分离菌与3种脂环酸芽孢杆菌标准菌的16SrDNA序列对比,并进行系统发育分析。结果表明,橙汁中8株具有耐酸耐热性的菌株均为脂环酸芽孢杆菌属,其中1株AlicyclobacillusacidiphilusDSM14558,3株（此处忽略..）AlicyclobacillusacidoteresstrisDSM3922,4株A.acidocaldcular;柑橘园中有2株耐酸耐热菌为AlicyclobacillusacidiphilusDSM14558。(4)采用16SrDNAPCR-RFLP法对分离得到的13株耐酸耐热性菌株与3种脂环酸芽孢杆菌的标准菌进行聚类分析。结果表明,在87%的相似水平上,所有菌株分为5个种群和10个分支,其中P-1、P-5、K-1与标准菌A.acidiphilusDSM14558相似水平较高,可视为同一个种,即嗜热脂环酸芽孢杆菌；H-1、ZH-1、ZH-2与A.acidoterrestriusDSM3922相似水平较高,可视为同一个种,即酸土脂环酸芽孢杆菌；NFC-1、NFC-2、NFC-4、NFC-10另分一支,NFC-4号菌经克隆测序及序列比对,结果与嗜酸耐热（文章此处忽略..）菌中的A.acidocaldarus序列同源性高达99%以上,说明这4株菌均是酸热脂环酸芽孢杆菌。此外,16SrDNAPCR-RFLP聚类与16SrDNA序列分析聚类结果较为一致,由此说明本研究结果是可靠的。(5)根据16SrDNA属间的高变区,种间的保守区,设计出一对针对脂环酸芽孢杆菌的特异性强、灵敏度高的引物。通过优化试验,得到最佳扩增条件为：25μL扩增体系中,ddH2O17.75μL,10xbuffer2.5μL,25mMMg2+1.5μL,10mMdNTP1.5μL,35L0.3μL,35R0.3μL,5U／ulTaq酶0.13μL,DNA模板1μL。扩增条件为：94℃5min；94℃40s,59.8℃40s,72℃40s,35个循环；72℃8min。在最佳的扩增程序下,PCR扩增脂环酸芽孢杆菌的基因组DNA最低量为10-4pg,扩增脂环酸芽孢杆菌的最低菌液浓度为3.0×103CFU／mL。(6)成功建立（此处忽略..）了脂环酸芽孢杆菌的PCR快速检测方法。该方法的整体体系为：20mL橙汁→80℃13min→10mL接种于BAT培养液→225r／min45℃的条件下气浴振荡培养25h→采用CTAB法提取DNA→进行PCR扩增→琼脂糖电泳检测扩增产物→结果判断。整个检测过程约需要2-5d,而传统常规检测过程约需要7-14d。

以上为本篇毕业论文范文橙汁与柑橘园中脂环酸芽孢杆菌的分离鉴定与检测研究的介绍部分。

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