IgH/CCND1基因的检测及其在MCL中意思的研究

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IgH/CCND1基因的检测及其在MCL中意思的研究

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毕业论文范文题目：IgH/CCND1基因的检测及其在MCL中意思的研究，论文范文关键词：IgH/CCND1基因的检测及其在MCL中意思的研究
IgH/CCND1基因的检测及其在MCL中意思的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：研究背景跟目标淋巴瘤尤其长短霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin'slymphoma,NHL)是一类组织状况跟类型复杂多变的肿瘤,而不同的病理类型存在不同的临床表示及医治反应,因此分型诊断始终是病理诊断的重点跟难点,也是人们始终研究摸索的焦点。近年来跟着研究的深刻及材料的积聚,多品种型淋巴瘤得到明白辨别,然而对套细胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma,MCL),人们始终不明白的意识。MCL是淋巴瘤中较少见,但特异的一品种型,文献报道约占NHL的3%～10%,以50～70岁的男性多见。该瘤发病隐匿,大部分患者就诊时多已呈弥散性病变,80%的病人处在Ⅲ期或Ⅳ期,明白诊断时大概有70%的病例已累及骨髓、外周血,临床进展较其余多少类状况上类似的小B细胞淋巴瘤(B-SLL、FL、MZL)更快,在上述淋巴瘤中预后最差,预后甚至比恶性程度较高的弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuselargeb-celllymphoma,DLBCL)还差。因此MCL的正确诊断、与其余小B细胞淋巴瘤的辨别诊断,对正确地预感患者的发展法则、预后评估并抉择合适的医治打算存在重要的临床病理学意思。组织状况学是病理诊断最直接、最重要的根据,然而在实际工作中,当组织处理不当或状况不典范时,仅凭状况学表示作出明白诊断分型存在必定的艰苦,往往要借助其余相干指标的检测帮助诊断。目前免疫标记的检测在淋巴瘤的诊断中存在非常重要的地位,不仅可能辨别组织的良恶性,而且特定的标记有助于进一步确诊分型。研究发明CyclinD1蛋白在MCL中高表白,是MCL的重要诊断及辨别诊断指标。然而实际工作中因为标本的前期处理以及固定方法的影响,造成抗原活性降落或丧失,免疫组化检测CyclinD1蛋白的表白（本文此处忽略..）阳性率不高,文献报道为60%～70%,部分状况不典范的阴性表白病例不易确诊分型。近年来各种分子生物学技巧敏捷发展,尤其是基因及染色体异样检测技巧,已在淋巴瘤的诊断中被广泛利用。免疫球蛋白重链(immunoglobulinheavychain,IgH)基因重排是淋巴细胞特有的生物学变更,良性组织表示为多克隆重排,恶性淋巴瘤则表示为单克隆或寡克隆重排,而且不同类型的淋巴瘤有特定的重排情势。检测IgH基因重排不仅有助于良恶性的辨别诊断,对不同类型淋巴瘤的细胞来源也有必定的预示意思,而且IgH基因重排与淋巴瘤中常见的多少种染色体畸变有关。染色体畸变是淋巴瘤种的常见事件,其中染色体t(11;14)(q13;q32)易位是MCL最具特点性的遗传学改变,该易位导致CyclinD1蛋白的高表白,多少乎所有的MCL均有这种染色体异样。世界卫生组织认为,检测遗传学异样是恶性淋巴瘤诊断分型最坚固的指标,在分子遗传学程度检测染色体t(11;14)(q13;q32)易位,对MCL的诊断更为敏感跟特异。目前常用的检测方法有传统的细胞遗传学染色体核型分析、Southern印迹法、PCR检测等,但各出缺点,限度了利用。新的遗传学方法荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH),对细胞分子遗传学的诊断有重要价值,传统FISH采取超薄切片,轻易造成遗传信息丧失,而且价格昂贵,难以在国内发展利用,本课题组前期树破的细胞核微阵列FISH法检测染色体易位存在高效,经济的特点,合适于在实验与临床中发展利用。本研究以收集的MCL标本为重要研究对象,同时以状况上与之类似的其余多少类小B细胞淋巴瘤(包含B-SLL、MZL、FL、MALT)作对比分析,从组织状况、免疫表型（此处忽略..）、IgH基因重排及染色体t(11;14)易位检测等诸多方面进行了研究分析,旨在为MCL的病理诊断提供敏感、特异的诊断指标跟方法,对临床医治跟预后提供更多的信息。方法1.临床材料收集及状况、免疫表型分析收集南方病院2002年至2006年五年间收治的经外科手术病理确诊为NHL的标本412例进行收拾分类,从当选取MCL及状况上与之类似的其余多少类小B细胞淋巴瘤,同时从“广东省淋巴瘤合作组”组成单位收集标本,共收到标本118例,进行状况及免疫表型分析。2.IgH基因重排检测从收集的标本当选取组织丰富的淋巴瘤标本63例(MCL31例、B-SLL13例、MALT8例、FL9例、MZL2例),另取慢性扁桃体炎10例做对比,采取半巢式PCR检测IgH基因重排。在PCR模板的制备方法上,采取了试剂盒提取法、直接消化水煮法跟本研究新树破的细胞核水煮法三种方法对比分析;并对扩增产物采取个别琼脂糖电泳(agargelelectrophoresis,AGE)跟毛细管电泳(Capillaryelectrophoresis,CE)检测进行对比分析。3.染色体t(11;14)(q13;q32)易位检测对本课题组前期树破的细胞核提取及核阵列制造方法进行恰当改进,细胞核的提取采取改进水浴加热脱蜡法调换前期常温脱蜡法,核阵列的制造采取直接点阵法调换前期蜡膜打孔点阵法。采取个别PCR、半巢式PCR及本课题组前期树破的细胞核微阵列荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)法,检测73例标本中染色体t(11;14)(q13;q32)易位,并对不同检测方法所得成果进行对比分析。4.统计学方法不同方法检测率之间的比较采取x2测验,样本均数之间的比较采取单向方差分析(one-wayANOVA),多组样品间的彼此比较采取多重比较分析。统计（本文此处忽略..）软件利用SPSS13.0统计软件包。成果1.MCL与NHL临床材料及状况、免疫表型成果(1)本组412例NHL中小B细胞淋巴瘤为62例,占15.05%,其中MCL仅4例,占NHL的0.97%。(2)免疫表型分析成果显示,采取EDTA高压煮沸进行抗原修复,以及在抗原修复前用0.4%的胃蛋白酶对组织进行恰当消化,可能进步CyclinD1检测的阳性率,CyclinD1的表白在MCL中的阳性检测率为76.47%,明显高于其余多少类小B细胞淋巴瘤。2.MCL及小B细胞淋巴瘤中IgH基因重排检测成果(1)三种石蜡包埋组织DNA提取方法中,细胞核水煮法提取的DNA含量最高,其纯度较试剂盒提取的DNA稍低,但高于直接消化水煮法。AGE检测,试剂盒提取的DNA完全性最好(＞5Kb);细胞核水煮法提取的DNA片段＞2Kb,电泳条带清楚;直接消化水煮法提取的DNA则为弥散、小片段。细胞核水煮法提取的DNAβ-globin扩增阳性率为87.50%,低于试剂盒提取法,但高于直接消化水煮法。(2)CE检测MCL中IgH基因重排阳性率为90.32%(28/31)高于AGE检测阳性率(83.87%),1例B-SLL、3例FL跟3例慢性扁桃体炎标本,AGE检测为单条带,经CE检测证明为多克隆性重排。(3)IgH基因重排检测的阳性率在MCL跟B-SLL中较高,分辨为90.32%跟76.92%;在FL、MALT跟MZL中则较低,分辨为44.44%、42.86%跟50.00%。3.MCL及小B细胞淋巴瘤中染色体t(11;14)(q13;q32)易位检测成果(1)采取个别PCR检测MCL中t(11;14)(q13;q32)易位阳性率仅为25.81%(8/31),采取半巢式PCR检测阳性率为35.48%,较个别PCR有所进步。(2)采取改进水浴加热脱蜡法提取的细胞核杂质少、品质佳;直接点阵法制造的核阵列背景干净,细胞核分布均一。(3)核阵列FISH法检测t(11;14)(q13;q32)易位,阳性率为93.10%(27/29),所做FISH图像背景低,信号强,定位正确。论（略..）断1.CyclinD1是MCL的一个特异性标记,抗原修复前用0.4%的胃蛋白酶恰当消化,可能进步其检测阳性率,但仍有部分阴性表白病例难以确诊分型。2.本研究树破的细胞核水煮法提取石蜡包埋组织DNA,存在简便、高效、低本钱及高DNA得率的长处。3.CE检测PCR扩增产物可能对AGE检测的可疑成果进行校订。4.本研究树破的改进细胞核提取及核阵列制造方法优于本组前期树破的方法。5.t(11;14)(q13;q32)易位是MCL诊断及辨别诊断的特异性指标;FISH较PCR检测t(11;14)易位灵敏度跟特异性更高,尤其是细胞核阵列FISH方法存在简便、高效、经济的特点。翻新之处:1.在石蜡包埋组织DNA提取中,提出了细胞核水煮法,并在本次研究中利用得到了幻想成果。2.采取CE检测PCR成果,校订了AGE检测的可疑成果。3.对细胞核的提取及核阵列的制造进行了恰当改进,进步了品质,简化了操作。

以上为本篇毕业论文范文IgH/CCND1基因的检测及其在MCL中意思的研究的介绍部分。

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