腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞作用的研究

搜索高级搜索

原创毕业论文

腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞作用的研究

作者: 浏览:4次

免费专业论文
政治工作论文
计算机论文
营销专业论文
工程管理论文范文
医药医学论文范文
法律论文范文
生物专业论文
物理教学论文范文
人力资源论文范文
化学教学论文范文
电子专业论文范文
历史专业论文
电气工程论文
社会学专业论文
英语专业论文
行政管理论文范文
语文专业论文
电子商务论文范文
焊工钳工技师论文
社科文学论文
教育论文范文
数学论文范文
物流论文范文
建筑专业论文
食品专业论文
财务管理论文范文
工商管理论文范文
会计专业论文范文
专业论文格式
化工材料专业论文
英语教学专业论文
电子通信论文范文
旅游管理论文范文
环境科学专业论文
经济论文
人力资源论文范文
营销专业论文范文
财务管理论文范文
物流论文范文
财务会计论文范文
数学教育论文范文
数学与应用数学论文
电子商务论文范文
法律专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文
计算机专业论文
环境艺术专业论文
信息计算科学专业
物流专业论文范文
人力资源论文范文
教育管理论文范文
现代教育技术论文
小学教育论文范文
机械模具专业论文
报告,总结,申请书
理工科专业论文
心理学论文范文
学前教育论文范文

毕业论文范文题目：腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞作用的研究，论文范文关键词：腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞作用的研究
腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞作用的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：子宫内膜癌(endometrialcarcinoma,EC)是女性最常见的恶性肿瘤之一,据文献报道,子宫内膜癌的发病率逐年回升。近20年对于子宫内膜癌的医治有进展,但在仍存在问题,晚期子宫内膜癌患者仍然存在着医治后果差、5年生存率低的问题。由畸形子宫内膜演变为子宫内膜癌是一个漫长的过程,寻找子宫内膜癌产生的早期分子变更,从分子程度逆转肿瘤细胞的恶性行动,对子宫内膜癌的防治至关重要。自1997年一种新的抑癌基因PTEN被发明以来,已经被证切实多种恶性肿瘤中都有渐变,是继p53之后又一重要的抑癌基因。目前文献报道在子宫内膜癌中的渐变率为26%～80%,是子宫内膜癌中渐变率最高的基因,也是该肿瘤占主导地位的渐变基因,更进一步的研究表明在子宫内膜癌前病变中PTEN的渐变率为18%～55%,因此,PTEN基因渐变是子宫内膜癌的早期分子事件,在子宫内膜适度增生发展至子宫内膜癌中起侧重要作用。本课题的目标是构建重组野生型PTENcDNA的复制缺点腺病毒,并由其介导,将野生型PTENcDNA转入人子宫内膜癌细胞RL95-2中,研究外源性PTEN的表白对RL95-2细胞生物学行动的影（略..）响。本研究可为临床诊断跟医治子宫内膜癌提供新的思路跟实际基本。目前,通过腺病毒介导野生型PTENcDNA作用于子宫内膜癌的研究,国内尚未见报道。课题研究的重要内容包含:(1)野生型PTENcDNA的重组腺病毒载体质粒AdEasy-PTENcDNA(Ad-PTENcDNA)的构建;(2)PTENcDNA重组腺病毒Ad-PTEN的产生、鉴定跟滴度测定;(3)Ad-PTEN介导的PTENcDNA在RL95-2细胞中的表白鉴定;(4)Ad-PTEN用于子宫内膜癌基因医治的体外研究,即外源性野生型PTENcDNA的表白对RL95-2细胞的成长、增殖跟凋亡的影响。3WP=8第二军医大学硕士研究生毕业论文方法:1.用限度性内切酶KpnⅠ、XhoⅠ将PTENcDNA自pcDNA3.0PTENcDNA质粒中酶切下来,由T4DNAligase联接到穿梭载体pShuttle-CMV上;2.穿梭质粒pShuttle-CMV-PTENcDNAPmeⅠ酶切、去磷酸化,而后与质粒pAdeasy-1一起电穿孔进入大肠杆菌BJ5183,进行同源重组制备重组腺病毒载体质粒pAdeasy-PTENcDNA。3.（略..）PacⅠ酶切质粒pAdeasy-PTENcDNA,胶回收后获得的腺病毒基因组DNA,用脂质体转染的方法转染HEK293细胞(腺病毒包装细胞),产生复制缺点型重组腺病毒Ad-PTEN,扩增病毒并测定病毒滴度。4.Ad-PTEN感染人子宫内膜癌细胞RL95-2,用反向聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹分析(Western-Blotting)两种方法鉴定PTENcDNA的表白。5.X-gal染色方法测定腺病毒转染效力。6.RL95-2细胞表白外源性PTENcDNA后成长、增殖实验,包含台盼蓝染色活细胞计数绘制成长曲线,MTT实验测定细胞增加克制率,流式细胞分析仪(FCM)测定细胞周期。7.PTENcDNA的表白引诱RL95-2细胞凋亡,包含核DNA片段化实验(DNAladder),Caspase3检测,细胞膜PS外翻实验。成果:1.重组质粒pShuttle-CMV-PTENcDNA经双酶切跟DNA序列测定鉴定证明,野生型PTENcDNA片段序列以正确方向插入穿梭载体。2.经PacⅠ酶切跟DNA序列分析证明,穿梭质粒pShuttle-CMV-PTENcDNA与腺病毒骨（此处忽略..）架质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中成功产生同源重组,产生重组腺病毒载体pAdeasy-PTENcDNA。3.重组腺病毒载体转染HEK293细胞7～10天后可见细胞变圆、肿胀,呈葡萄串状、并有少量浮起等细胞病变景象(CPE)。此时收集细胞重悬于PBS中,经四次反复冻融获得的上清中含有大量重组腺病毒颗粒Ad-PTEN。4.重组腺病毒的鉴定:PTENcDNA重组腺病毒基因组DNA为模板的PCR产物存在预期的大小的DNA片段,提示重组腺病毒基因组DNA存在PTENcDNA序列。5.提取重组腺病毒Ad-PTEN感染的RL95-2细胞总RNA进行RT-PCR,成果提示,该重组腺病毒感染后的宿主细胞存在PTENcDNA对应的mRNA表白;Western-Blotting方法鉴定PTEN蛋白在RL95-2细胞中有表白。TCID50法测定重组腺病毒Ad-PTEN的滴度为5×109pfu/ml。6.腺病毒转染效力是目前常用的基因转移方法中较高的一种,本实验测得Ad-PTEN最佳感染复数为50。7.经台盼蓝染色活细胞计数后绘制细胞成长曲线,见经Ad-PTEN感染的细胞成长速度明显（本文此处忽略..）低于空载体病毒Ad-CMV感染及未经病毒感染的RL95-2细胞4WP=9第二军医大学硕士研究生毕业论文(P0.01),而空载体Ad-CMV感染后的细胞与未经感染的RL95-2细胞比较,成长速度减慢,但无统计学差别(P0.05);MTT实验,证明外源性PTENcDNA的表白后的RL95-2细胞吸光度A值明显低于对比组(P0.01),病毒对细胞成长的克制率与对比组比拟明显增加(P0.01),并随时光的延长,这种克制造用逐步加强;FCM检测出,感染Ad-PTEN后的RL95-2细胞G0-G1期细胞比例明显增多,而S期G2-M期的细胞减少(P0.05);以上实验阐明,外源性野生型PTENcDNA的表白克制RL95-2细胞的成长增殖,将细胞周期阻滞在G1期。8.RL95-2

以上为本篇毕业论文范文腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞作用的研究的介绍部分。

本论文在经济论文栏目，由论文网(www.zjwd.net)整理,更多论文,请点论文范文查找

收费专业论文
汉语言文学论文
物理学论文
自动化专业论文
测控技术专业论文
历史学专业论文
机械模具专业论文
金融专业论文
电子通信专业论文
材料科学专业论文
英语专业论文
会计专业论文
行政管理专业论文
财务管理专业论文
电子商务国贸专业
法律专业论文
教育技术学专业论文
物流专业论文
人力资源专业论文
生物工程专业论文
市场营销专业论文
土木工程专业论文
化学工程专业论文
文化产业管理论文
工商管理专业论文
护理专业论文
数学教育专业论文
数学与应用数学专业
心理学专业论文
信息管理专业论文
工程管理专业论文
工业工程专业论文
制药工程专业论文
电子机电信息论文
现代教育技术专业
新闻专业论文
热能与动力设计论文
教育管理专业论文
日语专业论文
德语专业论文
轻化工程专业论文
社会工作专业论文
乡镇企业管理
给水排水专业
服装设计专业论文
电视制片管理专业
旅游管理专业论文
物业管理专业论文
信息管理专业论文
包装工程专业论文
印刷工程专业论文
动画专业论文
营销专业论文范文
工商管理论文范文
汉语言文学论文范文
法律专业论文范文
教育管理论文范文
小学教育论文范文
学前教育论文范文
财务会计论文范文

电子商务论文范文

上一篇：我国保税区监管法律轨制研究

下一篇：中国与东盟区域经济配合研究