含CDglyES的双功能融合基因的重组腺病毒对放疗增敏作用的实验研

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含CDglyES的双功能融合基因的重组腺病毒对放疗增敏作用的实验研

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含CDglyES的双功能融合基因的重组腺病毒对放疗增敏作用的实验研毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：本研究首先用PCR法从课题组构建的含CD基因的重组腺病毒(rAd-CD)中扩增出CD基因，将其插入腺病毒穿梭质粒(pAdTrackCMV)，而后从含ES基因的分泌型表白质粒pEZZ-18-ES中扩增出glyES基因，将两者融合构建成含CDglyES融合基因的腺病毒穿梭质粒phdTrackCMV-CD。而后转化大肠杆菌BJ5183，构建出重组腺病毒质粒pAdTrackCMV-CDglyES，用卡那霉素筛选重组质粒，用限度性内切酶酶切、PCR扩增跟测序对插入基因进行鉴定。而后经脂质体介导转染293细胞进行包装跟扩增，借助报告基因监控跟筛选重组腺病毒。采取氯化铯密度梯度离心纯化病毒，用TCID_(50)法滴定其浓度。为了证明融合基因CDglyES存在双重活性，进行了初步的体外抑瘤实验。将纯化重组腺病毒稀释成1×10~(10)TCID_(50)/L，分辨感染肝癌细胞株SMMC-7721跟宫颈癌细胞株Hela24小时，给予前药5-FC，持续培养48小时后，检测肿瘤细胞成长克制率；并与对比重组病毒rAd-CD（本文此处忽略..）跟rAd-LacZ的肿瘤细胞成长克制率进行比较。成果显示融合基因体系对SMMC-7721细胞的克制率达78.2％，与rAd-LacZ／5-FC(52.2％)体系比较有明显性差别，P＜0.01；融合基因体系(78.1％)跟rAd-CD／5-FC体系(77.7％)对Hela细胞的成长克制率与rAd-LacZ／5-FC体系(50.2％)比较有明显性差别，p＜0.01；而rAd-CDglyES／5-FC体系跟rAd-CD／5-FC体系比较无明显性差别，p＞0.5。这一成果证明了CDglyES融合基因中，基因的融合未影响硕士研究生学位论文CD基因活性。稀释的rAd一cDglyES细胞培养上清液对脐静脉血管内皮细胞ECV一304增殖的克制率为78.7%，同样稀释的rAd一CD细胞培养上清液克制率仅为24.2%，有明显性差别，P0.01，同样证明了CDglyES融合基因中基因的融合未影响ES基因的活性。在体内程度的实验中，对津白11号小鼠的MA737乳腺癌模型进行了抑瘤实验。将MA737移植瘤小鼠分为7组，分辨是空白对比组、单放组、单予CDgl妞S组、CDgly（文章此处忽略..）ES+放疗(14Gy)组、CDgl正S+5一FC组、CDglyES+5一FC+放疗(14Gy)组、CDglyES+5一FC十放疗(7Gy)组。CDglyES用法为排肠肌打针，5一FC用法为腹腔打针。设定了多个察看指标对各组成果进行比较:(I)肿瘤大小:实验结束时各组分辨处死一只瘤体大小居中的小鼠并作解剖，各组均匀瘤体大小排列次序(由大到小)为第1组、第3组、第7组、第5组、第2组、第4组跟第6组;(2)均匀瘤体分量:第1组的肿瘤最重，成长最为敏捷，按分组请求处理后各组肿瘤均表示出不同程度的成长延迟，第6组的成长延迟最为明显，远高于其余各组，肿瘤均匀分量也远小于其余各组;(3)中位生存期:第1组的均匀中位生存期最短，第6组的均匀中位生存期明显善于其余各组，P0.01，其余各组均匀中位生存期排序为(由短到长)第3组、第2组、第5组、第4组、第7组;(4)病理组织状况:按分组请求处理25天后，第l组的肿瘤内仍可找到较多的核决裂象，肿瘤成长仍然茂盛，第6组的肿瘤内可见较多的凋亡景象，肿瘤血管分布也明显少于其余各组;⑤肺转移情况:按分组（本文此处忽略..）请求处理25天后，第1组的肺组织内有肿瘤转移灶且体积较大，将畸形肺组织挤压变形、肺泡壁塌陷，而第4组肺内转移灶明显小于第1组，转移性肿瘤细胞呈现比较多的坏逝世、组织碎片较多，第6组小鼠肺内转移灶多少乎难以发明，肺泡壁基本保持畸形状况。3硕士研究生学位论文重组腺病毒(rAd一CDglyES)结合放疗组小鼠的放疗相干毒性反应与对比组比拟并无明显增加。以上成果证明:首先，含双功能融合基因的重组腺病毒(「Ad一CDglyES)存在CD基因活性，对肿瘤细胞存在直接杀伤作用，亦存在ES基因活性，对肿瘤细胞存在间接的克制、杀伤作用;其次，该重组腺病毒表白产物存在ES活性，能克制肿瘤新生血管的构成，进而禁止肿瘤细胞产生远处转移;第三，本研究首次揭示该重组腺病毒存在CD及ES双重对放疗的增敏作用，其中CD基因将5一FC转化为5一FU，发挥放疗增敏作用，ES基因表白产生内皮抑素，也起到了放疗增敏作用，其机制可能是将肿瘤血管的内皮细胞改变成为射线细胞毒性作用的靶细胞，导致（文章此处忽略..）其有丝决裂后逝世亡或凋亡。本研究利用重组腺病毒载体介导CDglyES融合基因进行了初步的体外跟体内抑瘤实验，成果证明重组腺病毒rAd一cDglyEs在体外、体内水均匀存在直接跟间接抑瘤作用，并存在明显的放疗增敏作用，证明本研究的构思正确获得了预期的成果。同时还有很多问题，如基因医治中前体药物给予的最佳时光跟剂量，结合放疗的最佳时光及剂量，何种、何情势的基因对放疗增敏作用强弱的比较，以及基因医治+放疗对不同肿瘤的作用差别的察看等，这些问题仍需进一步深刻研究，以期找到更为有效的医治恶性肿瘤的方法。

以上为本篇毕业论文范文含CDglyES的双功能融合基因的重组腺病毒对放疗增敏作用的实验研的介绍部分。

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