CML基因疫苗的构建及表达bcr-abl融合基因片段的SP2/O细胞系的建

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CML基因疫苗的构建及表达bcr-abl融合基因片段的SP2/O细胞系的建

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CML基因疫苗的构建及表达bcr-abl融合基因片段的SP2/O细胞系的建毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：慢性髓性白血病(Chronicmyeloidleukemia,CML)是一种起源于多能干细胞的恶性增生性疾病，其最重要的细胞遗传学特征是存在特异性的Ph染色体，第9号染色体上的原癌基因c-ab1易位到第22号染色体的断点集中区(bcr)形成bcr-ab1融合基因，编码bcr-ab1融合蛋白(p210~(bcr-ab1))。p210~(bcr-ab1)具有高酪氨酸激酶活性，与细胞恶性转化密切相关，而p210~(bcr-ab1)的抗原性限定在其融合位点内，这段氨基酸序列在正常细胞中不存在，因此该序列可作为肿瘤特异性抗原。本研究从以下三个方面探索利用b（此处忽略..）cr-ab1融合基因片段制备CML基因疫苗的研究。一、慢性髓性白血病bcr-ab1融合基因片段的克隆与原核表达的研究以慢性髓性白血病细胞株K562细胞总RNA为模板，采用RT-PCR技术扩增包含bcr-ab1融合位点周围的基因片段，定向克隆到pGEX-6P-1载体谷光甘肽-S-转移酶(GST)的下游。将重组质粒转化大肠杆菌BL_(21)菌株，以1.0mmol／lIPTG诱导bcr-ab1融合基因片段的表达，其产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，结果证实该融合蛋白分子量约42KD。用该表达产物免疫ICR小鼠，所制备的抗血清可与K562细胞（本文此处忽略..）中特异性抗原结合，表明该bcr-ab1／GST融合蛋白具有bcr-ab1基因产物的特异抗原性。二、慢性髓性白血病bcr-ab1融合基因片段真核细胞表达的研究根据ber一abl(b3aZ)融合基因序列设计一对引物，以CMLK562细胞总RNA为模板，通过Rl’-pCR扩增包含忱r.abl融合位点周围的450bP的基因片段，并将其克隆进pGEM一Teasy载体。经序列测定证实其阅读框架正确后，将b叮‘abl融合基因片段正向插入真核表达载体peDNA3.1。以脂质体介导重组质粒PcDNAbe卜abl转染CHO细胞，间接免（此处忽略..）疫荧光检测结果显示，peDNAbcr-abl转染CHO细胞的免疫荧光强度高于K562阳性对照细胞。用该重组质粒DNA免疫BALB/c小鼠可产生特异性抗体。三、稳定表达忱r‘abl融合基因片段的人一鼠嵌合肿瘤细胞系的建立从重组克隆载体pGEMber.abl中酶切出bcr.abl融合基因片段，并将其亚克隆进反转录病毒载体pLxsN中。脂质体介导重组反转录病毒载体pLXsNber.abl转染包装细胞PT67，G418筛选后获得稳定产病毒的包装细胞。收集病毒上清感染sPZ/o细胞(H一Zd)，经G418筛选获得稳定表达忱（此处忽略..）卜abl融合基因片段的Sp刀0细胞株。PCR证实bcr-abl融合基因片段已稳定整合于SP2/0细胞基因组中，RT-PCR证实感染后的SPZ/0细胞能稳定表达b二.abl融合基因片段，从基因组整合和基因表达水平证实我们获得了能稳定表达加卜abl融合基因片段的人一鼠嵌合肿瘤细胞系，作为研究be卜abl融合基因疫苗的实验工具。

以上为本篇毕业论文范文CML基因疫苗的构建及表达bcr-abl融合基因片段的SP2/O细胞系的建的介绍部分。

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