利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究

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利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究

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毕业论文范文题目：利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究，论文范文关键词：利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究
利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：生防酵母菌34-9(Kloeckeraapiculata)是本实验室从自然界中自主分离得到的,对柑橘青、绿霉病具有很强的拮抗作用,但因絮凝性差、生物量低、抗菌谱窄和抑菌活性有待提高等问题,限制了其商业化应用。为了提高现有生防酵母的综合性状,迫切需要对其在基因水平上进行遗传改良,同时为进一步开发出新型、安全无毒、多功能的生物保鲜剂提供理论依据。本研究对菌株34-9的遗传改良进行了初步探索。采用双亲灭活原生质体融合技术,分析了影（文章此处忽略..）响亲本菌株34-9和酿酒酵母原生质体制备与再生的主要因素,明确了原生质体制备和再生的最佳条件,确立了原生质体灭活条件,对融合子进行了初步筛选和鉴定。同时利用根癌农杆菌介导的转化、醋酸锂法和电转化的转化方法,对菌株34-9转化条件进行了摸索,并对转化子进行了初步鉴定。主要研究结果如下：1.利用rDNA-ITS分子鉴定,进一步证实了菌株34-9的属、种名。确定该菌株为柠檬形克勒克氏酵母(K.apiculata),是有孢汉逊酵母属(Hans（本文此处忽略..）eniasporauvarum)的无性世代。2.分别确定了菌株34-9和酿酒酵母原生质体制备和再生的适宜条件。菌株34-9原生质体制备和再生的适宜条件：采用0.05mol/LEDTA-Na2和0.5%p-巯基乙醇混合液,28℃预处理10min；培养时间为16h；酶解液浓为1.5%的蜗牛酶,酶解时间为3h；渗透压稳定剂为0.8mol/L的KCl溶液。酿酒酵母原生质体制备和再生的适宜条件：最适产孢培养基为Kleyn；培养时间为26h；酶解液浓度为1.5%的蜗牛酶,酶解时间为2h（略..）；渗透压稳定剂为0.8mol/L的蔗糖溶液。3.确立了菌株34-9和酿酒酵母原生质体灭活的适宜条件。菌株34-9化学灭活的参数：0.9%的碘乙酸作用10min；酿酒酵母热灭活参数：55℃作用15min。在28℃条件下,利用35%PEG-4000作为促融剂进行融合。4.以菌株34-9和酿酒酵母为亲本,进行原生质体双亲灭活和融合,经过菌落大小、絮凝性检测和对峙实验初步筛选出融合子RH-1,其絮凝形成速度比对照明显快且絮凝物大；并且融合子RH-1仍具有较好的抑菌效果。5.初步确定了（略..）菌株34-9电击转化的条件：对数生长期细胞,1mol/L山梨醇处理,20μg/mL质粒DNA,电压1.5kv,电击时间5msec,电阻200Ω,电容25μF,电击杯0.2cm；经初步鉴定获得5株转化子,且具有很高的遗传稳定性。

以上为本篇毕业论文范文利用原生质体融合及基因工程的方法对柑橘采后生防菌34-9遗传改良的初步研究的介绍部分。

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