碱性成纤维细胞生长因子微纳米包埋及与胶原基质的载荷技术研究

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碱性成纤维细胞生长因子微纳米包埋及与胶原基质的载荷技术研究

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毕业论文范文题目：碱性成纤维细胞生长因子微纳米包埋及与胶原基质的载荷技术研究，论文范文关键词：碱性成纤维细胞生长因子微纳米包埋及与胶原基质的载荷技术研究
碱性成纤维细胞生长因子微纳米包埋及与胶原基质的载荷技术研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：随着生物技术的高速发展,碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactors,bFGF)的应用越来越广泛。但是,bFGF作为一种碱性多肽,在体内扩散快、对热和酸敏感、易被蛋白酶分解、半衰期短,因此其生物学效应不能得到充分发挥。如何有效地发挥bFGF的生物学效应制约着bFGF的进一步体内应用研究。药剂学的缓释技术较好的解决了这个问题。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为一种比较理想的药物缓释载体材料,通过W_1/O/W_2溶剂挥发法(复乳法),对bFGF进行微纳米包埋,制备成bFGF-PLGA缓释微球,使其与外界的酶解环境相对隔离,能够在相当长的时间内缓释药物并使局部药物浓度维持在一个相当的水平。但是,微球缓释技术在体外释放试验中存在一种明显的突施现象。通过bFGF缓释微球与胶原基质的进一步复合,能够缓解这一现象的发生。本论文首先采用了W_1/O/W_2溶剂挥发法,以bFGF为缓释药物、PLGA为药物载体,制备了bFGF-PLGA缓释微球,并进一步探讨了油相中PLGA种类、浓度、外水相中聚乙烯醇(PVA)浓度、初乳乳化速率、油水体积比(W_1/O)及内水相与外水相的体积比(W_1/W_2)等（此处忽略..）因素对微球各项性质的影响。通过改变实验参数,来观察各成球工艺条件下的成球效果,并进一步测定不同条件下微球的粒径大小及粒径分布情况。通过扫描电镜检测,观察到微球的表面比较圆滑,并呈现不同程度的孔隙结构。微球中bFGF的最小包封率为43.6%,最大的包封率为85.8%。采用体外释放实验来验证PLGA微球作为bFGF控制释放载体的可行性。亲水性药物(如bFGF等)从聚合物微球中持续释放,主要取决于载体聚合物本身的降解和药物本身的扩散。根据载体聚合物降解的规律和机制,微球中药物的释放可分为以下3个阶段:①突释期,微球表面或近表面的部分药物迅速溶解、扩散;②缓慢释放期,药物通过扩散或缓慢迁移的方式,由载体聚合物溶蚀而形成的多孔结构缓慢释放;③快速释放期,随着载体聚合物的进一步降解,其骨架结构遭到严重破坏,导致药物出现第二次大量释放。由于PLGA具有较长的降解周期,我们所制备的微球中药物体外释放的机制主要为药物的扩散,释放过程主要为药物的突释期和缓慢释放期。进行为期45天的体外释放实验验证了PLGA微球作为bFGF中长期控制释放载体的可行性。以bFGF-PLGA微球的粒径及其分布情况、载药量、包封率和较小的bFGF突释（本文此处忽略..）率为综合考察指标,确定了实验室条件下bFGF-PLGA缓释微球的较佳制备工艺,其制备工艺条件如下:PLGA种类为75/25、分子量为50k、浓度为10mg/ml、PVA质量分数为2%、W_1/O/W_2为15:2:50、初乳乳化速率为30krpm。bFGF-PLGA缓释微球的稳定性实验通过考察4℃低温实验条件下微球外观形貌、载药量、包封率、突释率、体外释放行为来评价。结果表明,bFGF-PLGA缓释微球样品经过4℃低温留样实验后微球的外观形貌、平均粒径、载药量、包封率、突释率没有发生明显的变化,同时其粒径分布、体外释放行为也没有发生明显的变化。另外,考虑到bFGF本身的保存温度,我们认为,bFGF-PLGA微球应该在4℃低温条件下保存。bFGF-PLGA缓释微球的活性检测实验表明,利用复乳法将bFGF进行微纳米包埋后,能够在一定程度上保持bFGF的生物活性,约为原bFGF活性的60%。通过各实验组成纤维细胞增殖情况显示:培养初期,bFGF组A值高于其余两组,培养中后期,bFGF-PLGA微球组A值高于bFGF组和空白对照组。掘此可推测出,培养初期,bFGF组中游离的bFGF数量多于微球组中通过缓释产生的游离bFGF数量;培养中后期（本文此处忽略..）,bFGF组中的大部分游离bFGF失去了活性,而bFGF-PLGA微球组却可以持续释放具有生物活性的bFGF,来进一步加强促细胞分裂增殖作用。因此,本实验室所制备的bFGF-PLGA微球在体外可以释出具有生物活性的bFGF,并可以达到有效生理浓度,促进细胞的分裂增殖,显示其作为bFGF中长期控释药物载体的应用潜力。采用酶解法从猪皮中提取胶原,通过HAc溶解制成均匀的胶原凝胶,冷冻干燥制成胶原海绵。可采用零长度EDC/NHS交联一步法和EDC/NHS交联与肝素复合同步法对胶原海绵改性加工,提高其力学性能。将bFGF-PLGA缓释微球与胶原基质进一步复合,得到包埋bFGF-PLGA缓释微球的胶原海绵支架。并进一步研究了这一支架中bFGF的体外释放情况以及在释放过程中支架的降解情况。实验结果显示,载有bFGF-PLGA缓释微球的胶原海绵,能够有效地缓解药物释放过程中的突释问题,突释率由19.8%降到14.6%。且体外释放药物浓度比较稳定,较之bFGF-PLGA缓释微球,其药物有效缓释时间更长。本文成功利用W_1/O/W_2复乳法制得bFGF-PLGA缓释微球。其平均粒径为微纳米级,具有一定的分布范围。由扫描（略..）电镜图片可观察到:微球呈完整的圆球形,单个微球观察,微球表面圆滑,并具有不明显的微孔结构,这些微孔结构可能是药物扩散的主要通道。按照bFGF-PLGA缓释微球的制备工艺制备了12批微球,微球载药量为(60.8±0.56)10~(-3)*%,药物包封率为(80.5±1.22)%。结果表明,微球的制备工艺比较稳定,重现性良好。bFGF-PLGA缓释微球的体外释放具有明显的突释现象,突释率为19.8%,随后进入缓慢释放期,45天的累积释放量为80%左右。通过bFGF-PLGA缓释微球与胶原基质的进一步复合,其体外释放行为的突释现象明显减弱,突释率仅为14.6%。bFGF-PLGA缓释微球的活性检测实验表明,本实验室所制备的bFGF-PLGA缓释微球中的bFGF活性得到了一定的保持,为研制符合临床治疗需要的中长效注射制剂提供实验依据;同时,复合bFGF-PLGA缓释微球的胶原海绵支架的研究则为深度创伤辅料和组织工程修复支架材料的研制提供了实验依据。

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