RNA干扰技术分析nm23-H1基因在人红白血病细胞K562分化中的作用

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RNA干扰技术分析nm23-H1基因在人红白血病细胞K562分化中的作用

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毕业论文范文题目：RNA干扰技术分析nm23-H1基因在人红白血病细胞K562分化中的作用，论文范文关键词：RNA干扰技术分析nm23-H1基因在人红白血病细胞K562分化中的作用
RNA干扰技术分析nm23-H1基因在人红白血病细胞K562分化中的作用毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的：应用RNA干扰技术，分析沉默nm23-H1基因对人红白血病细胞K562分化的影响，并初步探讨其作用机制，从而为靶向nm23-H1的白血病基因治疗方案提供理论依据。方法：采用阳离子脂质体将靶向nm23-H1基因的RNA干扰质粒pSilencer~(TM)4.1-CMV-siNM526转染K562细胞，经G418筛选建立干扰质粒稳定转录的细胞模型，PCR确认干扰质粒成功整合至细胞基因组中。通过Real-TimePCR和免疫细胞化学技术（本文此处忽略..）检测目标基因nm23-H1mRNA及其蛋白的表达水平，确认干扰质粒对nm23-H1基因的沉默效果。然后，瑞氏—吉姆萨染色观察沉默nm23-H1基因后细胞形态的变化，MTT法检测细胞生长的变化，流式细胞术分析细胞周期的改变。PMA诱导细胞后，NBT还原反应检测细胞对分化诱导剂敏感性和还原能力的变化，流式细胞术检测细胞表面抗原的表达。最后，Real-TimePCR检测nm23-H1基因沉默对分化相关基因c-myc表（略..）达的影响。结果：成功筛选得到整合有pSilencer~(TM)4.1-CMV-siNM526的细胞模型K562-siNM23，以及相应的阴性对照细胞K562-siNC。pSilencer~(TM)4.1-CMV-siNM526对靶基因nm23-H1的沉默效率超过70％。稳定沉默nm23-H1基因使K562细胞生长受抑，细胞阻滞于G_0／G_1期，但不诱导细胞凋亡，而对照组K562-siNC细胞则与K562细胞差别不大。从形态学上看，K562-siNM23出现向单核细胞和巨核细胞（此处忽略..）分化的趋势。沉默nm23-H1基因使K562细胞对分化诱导剂PMA的敏感性增强，促进经PMA诱导的K562细胞向巨核细胞定向分化。沉默nm23-H1基因下调了c-myc的表达，两者的表达呈正相关。结论：成功构建稳定沉默nm23-H1基因的细胞模型。沉默nm23-H1基因导致K562细胞的生长和增殖受到抑制，使细胞阻滞于G_0／G_1期；同时，细胞对诱导剂PMA的敏感性增强，促进PMA诱导的K562细胞向巨核细胞定向分化。另外，沉默nm23-H（略..）1导致c-myc的表达下调。这些现象提示，沉默K562细胞中的nm23-H1基因可促进细胞分化，其机制可能是通过阻滞细胞周期和下调c-myc基因的表达而实现。

以上为本篇毕业论文范文RNA干扰技术分析nm23-H1基因在人红白血病细胞K562分化中的作用的介绍部分。

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