利用大肠杆菌和耻垢分支杆菌表达系统制备结核诊断抗原的研究

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利用大肠杆菌和耻垢分支杆菌表达系统制备结核诊断抗原的研究

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毕业论文范文题目：利用大肠杆菌和耻垢分支杆菌表达系统制备结核诊断抗原的研究，论文范文关键词：利用大肠杆菌和耻垢分支杆菌表达系统制备结核诊断抗原的研究
利用大肠杆菌和耻垢分支杆菌表达系统制备结核诊断抗原的研究毕业论文范文介绍开始：
【论文摘要】：目的构建结核分支杆菌融合基因lhp-esat6和2×esat-6原核表达载体,分别在大肠杆菌和耻垢分支杆菌中同时诱导表达融合蛋白rCFP10-ESAT6和rdESAT-6,纯化蛋白,Western-blot分析其抗原性,并初步评估其诊断价值。方法以结核分支杆菌H37Rv基因组DNA为模板,经PCR扩增lhp和esat-6基因;用基因延伸拼接技术(SOE)将lhp和esat-6基因体外重组,构建lhp-esat6融合基因,并将其克隆至pET28a和pMF41质粒中分别构建pET28a-lhp-esa（本文此处忽略..）t6和pMF41-lhp-esat6原核表达载体。以DNA疫苗HG856A_2为模板,经PCR扩增2×esat6基因,并将其克隆至pET28a和pMF41质粒中分别构建pET28a-2×esat-6和pMF41-2×esat-6原核表达载体。将pET28a-lhp-esat6和pET28a-2×esat-6重组质粒转化E.coliBL21(DE3),以IPTG诱导表达融合蛋白rCFP-ESAT6(E.coli)和rdESAT-6(E.coli)。将pMF41-lhp-esat6和pMF41-2×esat-6重组质粒电转化耻垢分支杆菌M.smegmat（略..）is,以乙酰胺诱导表达融合蛋白rCFP10-ESAT6(M.smeg)和rdESAT-6(M.smeg)。通过SDS-PAGE鉴定其表达形式,用Ni~(2+)柱亲和层析纯化融合蛋白;用rESAT-6小鼠抗血清对纯化的四种融合蛋白进行Western-blot分析抗原性;用间接ELISA方法检测其抗结核抗体的敏感性和特异性,并以重组蛋白刺激IFN-γ全血试验(IGRA)评估重组抗原在结核病诊断中的价值。结果成功构建了原核表达载体pET28a-lhp-esat6、pET28a-2×esat-6、pMF41-l（本文此处忽略..）hp-esat6和pMF41-2×esat-6。融合蛋白在两种表达系统中均以包涵体形式表达;经Ni~(2+)柱亲和纯化的样品SDS-PAGE分析纯度在95%以上,并且四种融合蛋白均可与rESAT-6小鼠抗血清发生特异性反应。间接ELISA检测结果表明:用rCFP-ESAT6纯化蛋白进行结核病血清学诊断的敏感性为25%(5/20),特异性为95.8%(23/24);用rdESAT-6纯化蛋白进行结核病血清学诊断的敏感性为30%(6/20),特异性为95.8%(23/24),略好于文献报道的rESAT-6结果。结论本研究成功制备了结核分支杆菌的四种融合蛋白,并以（本文此处忽略..）此抗原建立了间接ELISA方法用于检测结核抗体试验;以及检测细胞免疫的IGRA试验,为以rCFP10-ESAT6和rdESAT-6为抗原的结核病免疫学诊断试剂研制奠定基础。

以上为本篇毕业论文范文利用大肠杆菌和耻垢分支杆菌表达系统制备结核诊断抗原的研究的介绍部分。

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